[发明专利]一株抗生链霉菌及其代谢产物的制备以及其在抗病菌方面的应用有效
| 申请号: | 202010376108.6 | 申请日: | 2020-05-07 |
| 公开(公告)号: | CN111411062B | 公开(公告)日: | 2021-10-01 |
| 发明(设计)人: | 杨祁云;林壁润;路征;张景欣;孙大元;吕永华;沈会芳;蒲小明 | 申请(专利权)人: | 广东省农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;C12N3/00;C12P17/08;A01N63/28;A01P3/00;C12R1/48 |
| 代理公司: | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人: | 刘瑜 |
| 地址: | 510640 *** | 国省代码: | 广东;44 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 抗生 霉菌 及其 代谢 产物 制备 抗病 方面 应用 | ||
1.一株抗生链霉菌,其特征在于:名称为抗生链霉菌(Streptomyces antibioticus)PPI-16,保藏编号为GDMCC NO:60970,该菌株于2020年3月5日保藏于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼的广东省微生物菌种保藏中心。
2.一种权利要求1所述的抗生链霉菌的孢子。
3.权利要求2所述的抗生链霉菌的孢子的制备方法,其特征在于:将权利要求1所述的抗生链霉菌接种到培养基上,于28~30℃条件下进行培养,得到抗生链霉菌的孢子;
所述的培养基的组成成分为:可溶性淀粉1~5g,葡萄糖2~10g,酵母提取物1~3g,蛋白胨1~2g,KNO3 0.5~1g,K2HPO4 0.1~0.5g,NaCl 0.1~0.5g,FeSO4 0.005~0.01g,MgSO4·7H2O 0.01~0.05g,琼脂10~15g,pH 7.2~7.4,加水定容至1000mL;
所述的培养的时间为3~5天。
4.一种抗生链霉菌的代谢物,其特征在于:为通过培养权利要求1所述的抗生链霉菌和/或权利要求2所述的抗生链霉菌的孢子获得。
5.权利要求4所述的抗生链霉菌的代谢物的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)将权利要求1所述的抗生链霉菌接种到斜面培养基上,于28~30℃条件下进行培养;
(2)将斜面培养基上的菌株接种到发酵培养基中进行发酵培养,过滤除去菌体,得到发酵液;然后将发酵液浓缩,得到浓缩液;浓缩液用乙酸乙酯萃取后再次浓缩,得到发酵浓缩物;
(3)将发酵浓缩物采用硅胶柱进行色谱分离,然后用体积比为3:20的乙酸乙酯与石油醚进行清洗,再用体积比为1:1的乙酸乙酯与石油醚进行洗脱,并收集洗脱液,得到抗生链霉菌的代谢物。
6.根据权利要求5所述的抗生链霉菌的代谢物的制备方法,其特征在于:
步骤(1)中所述的斜面培养基为:可溶性淀粉1~5g,葡萄糖2~10g,酵母提取物1~3g,蛋白胨1~2g,KNO3 0.5~1g,K2HPO4 0.1~0.5g,NaCl 0.1~0.5g,FeSO4 0.005~0.01g,MgSO4·7H2O 0.01~0.05g,琼脂10~15g,pH 7.2~7.4,加水定容至1000mL;
步骤(1)中所述的培养的时间为3~5天;
步骤(2)中所述的发酵培养基为:KNO3 0.5~1g,K2HPO4 0.1~0.5g,MgSO4·7H2O 0.1~0.5g,FeSO4 0.005~0.01g,海水晶0.1~0.5g,可溶性淀粉2~10g,葡萄糖5~10g,酵母膏15~20g,定容至1000mL,pH 7.2~7.4;
步骤(2)中所述的发酵培养的条件为:室温发酵培养5~7天;
步骤(2)中所述的浓缩为采用加热的方式进行浓缩;
步骤(2)中所述的浓缩为浓缩至发酵液体积的1/20~3/1;
步骤(2)中所述的再次浓缩为浓缩至原体积的1/3~1/5;
步骤(2)中所述的乙酸乙酯与浓缩液的体积比为1:1;
步骤(3)中所述的硅胶柱中的硅胶为200~300目硅胶。
7.根据权利要求5所述的抗生链霉菌的代谢物的制备方法,其特征在于,在步骤(3)之后还包括如下步骤:
将步骤(3)中得到的抗生链霉菌的代谢物通过高效液相色谱进行分离,得到抗霉素A1;其中高效液相色谱的流动相为甲醇与体积百分数为0.5%的甲酸水溶液按体积比4:1得到的混合溶液。
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