[发明专利]一种新型冠状病毒IgM/IgG二合一快速检测的试纸条、试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种新型冠状病毒IgM/IgG二合一快速检测的试纸条，包括基础板，基础板上沿长度方向设有依次相接的样品垫、金胶垫、硝酸纤维素膜层和吸水纸层，其特征在于：从样品垫到吸水纸层的方向上，硝酸纤维素膜层上依次设有两条检测线和一条质控线，两条检测线分别为包被鼠抗人IgM抗体的检测线和包被鼠抗人IgG抗体的检测线，一条质控线为包被兔抗鸡IgY抗体的质控线。

2.如权利要求1所述的新型冠状病毒IgM/IgG二合一快速检测的试纸条，其特征在于：金标垫上的金标抗体由被胶体金标记的鸡IgY单克隆抗体和被胶体金标记的新型冠状病毒N蛋白组成。

3.如权利要求2所述的新型冠状病毒IgM/IgG二合一快速检测的试纸条，其特征在于：被胶体金标记的鸡IgY单克隆抗体和被胶体金标记的新型冠状病毒N蛋白的质量比为1:(1±0.1)。

4.权利要求1-3任意一项所述的新型冠状病毒IgM/IgG二合一快速检测的试纸条的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)制备胶体金溶液；

(2)制备胶体金标记鸡IgY单克隆抗体；

(3)制备胶体金标记新型冠状病毒N蛋白；

(4)层析膜硝酸纤维素膜层的处理：

检测IgM抗体捕获区：将鼠抗人IgM抗体以1.0±0.02mg/ml的浓度进行划线，划量为0.6±0.2μl/cm，划完后置于18-25℃干燥12±1小时，得包被鼠抗人IgM抗体的检测线；

检测IgG抗体捕获区：将鼠抗人IgG抗体以1.0±0.02mg/ml的浓度进行划线，划量为0.6±0.2μl/cm，划完后置于18-25℃干燥12±1小时，得被鼠抗人IgG抗体的检测线；

质控区C：将兔抗鸡IgY抗体按1.0±0.02mg/ml的浓度进行划线，划量为0.6±0.2μl/cm，划完后置于18-25℃干燥12小时，得包被兔抗鸡IgY抗体的质控线；

(5)喷金：把胶体金标记鸡IgY单克隆抗体和胶体金标记新型冠状病毒N蛋白按照1:(1±0.1)的比例进行混合，按照喷量为3±0.5ul/cm进行金标抗体的喷球，喷好后置于18-25℃干燥10-12小时，得金胶垫；

(6)将样品垫、金胶垫、硝酸纤维素膜层和吸水纸层按顺序贴在塑料垫上，用切割机将其切成粗细均匀的窄条，装上外壳，得新型冠状病毒IgM/IgG二合一快速检测的试纸条。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，胶体金溶液的制备为：将质量浓度为0.03～0.04％的HAuCl₄·3H₂O溶液，加热至沸，并保持沸腾25-30分钟，然后加入质量浓度为2％柠檬酸三钠溶液混合煮沸，直到颜色变为橙红，室温冷却，即得胶体金溶液，其中，柠檬酸三钠溶液的质量用量为HAuCl₄·3H₂O溶液的2.5～3.0％。

6.如权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，胶体金标记鸡IgY单克隆抗体的制备为：用碳酸钾溶液将胶体金溶液的pH调节至8.0，然后把鸡IgY单克隆抗体加入胶体金溶液中，鸡IgY单克隆抗体与胶体金溶液的质量比为1：(10±1)，充分混匀，置于25±2℃水浴反应30±2分钟后，再加入相对胶体金溶液的质量用量为5±0.2％的BSA，封闭30±2分钟后，离心取沉淀，用BSA恢复其终浓度为1±0.1％，4±0.2℃保存备用。

7.如权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，胶体金标记新型冠状病毒N蛋白的制备为：用碳酸钾溶液将胶体金溶液的pH调节至7.0，然后把新型冠状病毒N蛋白按加入胶体金溶液中，新型冠状病毒N蛋白与胶体金溶液的质量比为1：(10±1)，胶体金溶液中，充分混匀，置于25±2℃水浴反应30±2分钟后，再加入相对胶体金溶液的质量用量为5±0.2％的BSA，封闭30±2分钟后，离心取沉淀，用BSA恢复其终浓度为1±0.1％，4±0.2℃保存备用。