[发明专利]卡马西平检测试剂盒

说明书

本申请公开了一种卡马西平检测试剂盒。具体而言，本申请涉及一种卡马西平衍生物及其制备方法，以及与含有上述卡马西平衍生物的试剂盒及其配制方法。本申请的技术方案使用了一种新型的卡马西平衍生物，并使用了选择性较高的偶联方法，使衍生物和酶进行一比一偶联，大大降低了常规偶联过程所形成的批间差。本申请的卡马西平检测试剂盒简便、快捷、成本低，可以在多种主流机型上进行自动化检测。

本申请是中国专利申请《一种卡马西平衍生物及其在免疫检测中的用途》(申请号201910337086.X，申请日2019年4月25日)的分案申请；并且要求中国专利申请201910315888.0(优先权日2019年4 月19日)的优先权。

技术领域

本申请涉及一种卡马西平检测试剂盒、卡马西平衍生物及其制备方法、一种卡马西平均相酶免疫检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

卡马西平(Carbamazepine)结构式如下所示：

卡马西平亦名酰胺咪嗪，是一种常见精神性药物，于1950年合成，结构类似于三环类抗抑郁药丙咪嗪，为亚胺基二苯乙烯衍生物，但无抗抑郁活性。口服吸收慢且不规则，服药2至4d后达稳态血浓度，有效血浓度为4μg/mL至12μg/mL，进食同时服用可增加吸收。主要通过肝脏代谢生成具有药理活性的卡马西平10,11-环氧化物，大部分以代谢物的形式从尿中排出，少量从粪便排出。

卡马西平是治疗癫痫发作(如全身或局部性癫痫发作、简单或复杂部分性癫痫发作)的首选药物，同时也在治疗三叉神经痛具有较好疗效。

血液中卡马西平浓度监测有以下三个方面原因：

1)卡马西平的药理活性与血液中药物浓度相关，而非使用剂量；

2)卡马西平代谢过程会由于个体化不同和长期治疗会有较大差异，特别是与其他药物同时使用时；

3)血液中卡马西平浓度在一个较窄的范围内安全且有效。

基于上述原因，卡马西平血药浓度监测，是辅助临床治疗、改善治疗效果、降低毒性风险的有效方式。

目前临床上监测卡马西平有多种方法，如直接化学发光法、荧光偏振免疫比浊法、酶联免疫吸附法、均相酶免疫测定法、胶乳凝集比浊法等。直接化学发光法、荧光偏振免疫比浊法、酶联免疫吸附法前者灵敏度高，但是需要昂贵的化学发光仪器，操作繁琐，检测时间长，自动化程度低，重复性较差。现有的均相酶免疫测定法、胶乳凝集比浊法也因稳定性差、制备工艺复杂、批间差大，应用受到一定限制。

现有技术中描述了一种卡马西平衍生物-G6PDH酶偶联物及其制备方法：

1)将G6PDH室温溶解于含有Tris、MgCl₂和NaCl的溶液中 (pH＝9.0)；

2)加入NADH、葡萄糖-6-磷酸以及卡必醇；

3)再逐滴加入二甲基亚砜；

4)在无水状态下称取卡马西平衍生物，溶解于DMF中；使溶液温度降到-2至-8℃；加入三丁胺；

5)加入氯甲酸异丁酯，-2至-8℃搅拌30分钟；

6)将上述激活的卡马西平衍生物溶液逐滴加入到溶解的G6PDH 溶液中，2至8℃搅拌过夜；

7)通过层析柱纯化步骤6)所得溶液，获得的最终产物为葡萄糖 -6-磷酸脱氢酶-卡马西平衍生物的偶联物，于2至8℃储存(例如，但不限于CN102768284A中所述方法)。