[发明专利]一种检测MLL-AF4融合基因的方法在审
| 申请号： | 202010372009.0 | 申请日： | 2020-05-06 |
| 公开（公告）号： | CN111500689A | 公开（公告）日： | 2020-08-07 |
| 发明（设计）人： | 张鹏;唐春花;邢宽;何志健;谢珍;倪海钰;周权;何贵伦;安雪茹;李平;江晓琴 | 申请（专利权）人： | 南京实践医学检验有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 南京瑞华腾知识产权代理事务所(普通合伙) 32368 | 代理人： | 梁金娟 |
| 地址： | 210000 江苏省南京市江北新区*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 mll af4 融合 基因 方法 | ||
1.一种检测MLL-AF4融合基因的方法，其特征在于：按照先后顺序依次包括以下步骤：
步骤一：样本DNA的获取：通过提取核酸的试剂对样本进行处理，获得待测样本的DNA；
步骤二：PCR反应液的配置：分为阳性对照、样本和阴性对照三管，每个管中的反应体系均为20μL，且用于扩增MLL-AF4融合基因的引物为：
F：5’-CCGCCCAAGTATCCCTGTAAAAC-3’；
R：3’-TCGTTATGTATGCGGATCATGTCG-5’；
步骤三：目的条带扩增：以待测样本的DNA为模板，通过设计的引物扩增需要的DNA片段；
步骤四：目的DNA回收：对上述PCR反应液进行1％琼脂糖凝胶电泳，回收目的条带；
步骤五：对上述步骤中DNA片段进行纯化处理；
步骤六：对纯化后的DNA进行转化；
步骤七：测序，判断是否为MLL-AF4融合基因。
2.根据权利要求1所述的一种检测MLL-AF4融合基因的方法，其特征在于：所述步骤二中引物序列的浓度为700-800nM。
3.根据权利要求1所述的一种检测MLL-AF4融合基因的方法，其特征在于：所述步骤三中将配好的试剂通过PCR仪中来扩增目的条带，其中PCR仪反应参数为：94℃，3min；进入循环程序，94℃，3s；55℃，45s；72℃，30s，循环次数为30次；72℃，10min。
4.根据权利要求1所述的一种检测MLL-AF4融合基因的方法，其特征在于：所述步骤一中样本为人和动物组织、新鲜植物组织或者为血液。
5.根据权利要求1所述的一种检测MLL-AF4融合基因的方法，其特征在于：所述阳性对照管中样本DNA为MLL-AF4融合基因溶液，且浓度为500拷贝/μL。
6.根据权利要求1所述的一种检测MLL-AF4融合基因的方法，其特征在于：所述阴性对照管中样本DNA为ddH2O。
7.根据权利要求1所述的一种检测MLL-AF4融合基因的方法，其特征在于：所述步骤二中PCR反应液组成及成分为DNA聚合酶(2×Taq Mix)14-17μL、引物序列F1μL、引物序列R1μL、样本DNA 1μL、加入ddH2O补至20μL。
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