[发明专利]一种心肌标志物的联合检测装置及其制备方法

权利要求书

1.一种心肌标志物的联合检测装置的制备方法，其特征在于：所述心肌标志物的联合检测装置包括：样品垫（1）、免疫胶体金玻璃纤维膜（2）、硝酸纤维素膜（3）、吸收垫（4）分别粘贴在塑料板（5），所述硝酸纤维素膜（3）的两端分别与吸收垫（4）、免疫胶体金玻璃纤维膜（2）搭接，所述免疫胶体金玻璃纤维膜（2）的另一端与样品垫（1）搭接；所述硝酸纤维素膜（3）上设置第一检测线T1、第二检测线T2、第三检测线T3、第四检测线T4和质控线C；所述的第一检测线T1上固相有高特异性MPO抗体；所述的第二检测线T2上固相有高特异性cTnI或cTnT抗体；所述的第三检测线T3上固相有高特异性H-FABP抗体；所述的第四检测线T4上固相有高特异性NT-proBNP抗体；所述硝酸纤维素膜3上设置的检测线T1、T2、T3、T4纵向排列在同一条硝酸纤维素膜（3）上，形成一个联合检测装置；所述硝酸纤维素膜（3）上设置的检测线T1、T2、T3、T4任意两个组合且分别设置在两条硝酸纤维素膜（3）上，并列排列形成一个联合检测装置；所述硝酸纤维素膜（3）上设置的检测线T1、T2、T3、T4分别设置在四条硝酸纤维素膜（3）上，并列排列形成一个联合检测装置；所述的质控线C上喷点羊抗鼠IgG多克隆抗体；所述制备方法，包括如下步骤：

（a）采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金；

（b）采用步骤（a）中制得的胶体金标记MPO、cTnI或cTnT、H-FABP和NT-proBNP抗体，获得免疫胶体金；

（c）采用喷金缓冲液稀释步骤（b）的免疫胶体金获得免疫胶体金溶液，用免疫胶体金溶液喷涂于玻璃纤维垫，制得免疫胶体金玻璃纤维膜；

（d）将硝酸纤维素膜用聚乙二醇丙三醇处理液预处理后，喷点与油酸修饰的硫化锌纳米颗粒结合的MPO、cTnI或cTnT、H-FABP和NT-proBNP抗体作为检测线，喷点羊抗鼠IgG抗体作为质控线，制得免疫硝酸纤维素膜；

所述的油酸修饰的硫化锌纳米颗粒制备方法：取油酸无水乙醇溶液 15ml 加入到15ml 浓度为 0.3mol/L 的醋酸锌水溶液中，40℃水浴搅拌，用氨水调节 pH 值，再加入15ml 浓度为 0.3mol/L 的硫化钠水溶液，反应 5min 后，加入 5ml SDS 水溶液，待混合均匀后，将该反应液倒入 90ml水热釜中，水热釜密闭后放入恒温干燥箱内，在一定温度下恒温反应一定时间，待反应结束，降温至 50℃，取出产物，用丙酮，去离子水，乙醇洗涤，离心分离，在 50℃下真空干燥 2h 得到粉体 ZnS，存放待用；

（e）将预处理的样品垫、步骤（c）制备的免疫胶体金玻璃纤维膜、步骤（d）制备的免疫硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在胶板上，切裁制得检测试剂条，最后将检测试剂条装入塑料外壳。

2.根据权利要求1所述的一种心肌标志物的联合检测装置的制备方法，其特征在于：步骤（a）所述的采用柠檬酸三钠还原法制备的胶体金颗粒粒径为20~60nm。

3.根据权利要求1所述的一种心肌标志物的联合检测装置的制备方法，其特征在于：步骤（c）所述的喷金缓冲液由Tris-HCL液、蔗糖、海藻糖、牛血清白蛋白BSA组成，pH值8.5，其中Tris-Hcl浓度为0.02mol/L，蔗糖浓度为5~20%，海藻糖浓度为1~5%，牛血清白蛋白BSA浓度为0.5~1% 。

4.根据权利要求1所述的一种心肌标志物的联合检测装置的制备方法，其特征在于：步骤（d）所述的将硝酸纤维素膜用聚乙二醇丙三醇处理液预处理是：用聚乙二醇丙三醇处理液浸泡硝酸纤维素膜1 h，并慢速振荡摇晃，取出后用蒸馏水清洗3遍，最后在真空干燥箱中干燥；

所述的油酸修饰的硫化锌纳米颗粒分别结合MPO、cTnI或cTnT、H-FABP和NT-proBNP抗体是：以油酸修饰的 ZnS作为载体，取 1 mL MPO、cTnI或cTnT、H-FABP和NT-proBNP抗体溶液，搅拌1小时后，分别以12000 rpm，8500 rpm和7000 rpm离心10分钟收集，去离子水各洗2遍。