[发明专利]用于逆转录病毒载体的生产细胞和包装细胞及其制备方法

权利要求书

1.一种用于制备用于生产携带目的核酸片段的逆转录病毒载体的生产细胞的方法，所述方法包括：

利用睡美人(Sleeping Beauty，SB)转座子系统将逆转录病毒的gag和pol基因的序列、病毒包膜蛋白的编码序列、以及携带目的核酸片段的病毒基因组转录盒序列中的一种或多种但非全部整合在宿主细胞的基因组中，然后利用PiggyBac(PB)转座子系统将所述逆转录病毒的gag和pol基因的序列、病毒包膜蛋白的编码序列、以及携带目的核酸片段的病毒基因组转录盒序列中的剩余的一种或多种进一步整合在所述宿主细胞的基因组中，或者利用PB转座子系统将逆转录病毒的gag和pol基因的序列、病毒包膜蛋白的编码序列、以及携带目的核酸片段的病毒基因组转录盒序列中的一种或多种但非全部整合在宿主细胞的基因组中，然后利用SB转座子系统将所述逆转录病毒的gag和pol基因的序列、病毒包膜蛋白的编码序列、以及携带目的核酸片段的病毒基因组转录盒序列中的剩余的一种或多种进一步整合在所述宿主细胞的基因组中。

2.一种用于制备用于生产携带目的核酸片段的慢病毒载体的生产细胞的方法，所述方法包括：

利用SB转座子系统将慢病毒的gag、pol和rev基因的序列、病毒包膜蛋白的编码序列、以及携带目的核酸片段的病毒基因组转录盒序列中的一种或多种但非全部整合在宿主细胞的基因组中，然后利用PB转座子系统将所述慢病毒的gag、pol和rev基因的序列、病毒包膜蛋白的编码序列、以及携带目的核酸片段的病毒基因组转录盒序列中的剩余的一种或多种进一步整合在所述宿主细胞的基因组中，或者利用PB转座子系统将慢病毒的gag、pol和rev基因的序列、病毒包膜蛋白的编码序列、以及携带目的核酸片段的病毒基因组转录盒序列中的一种或多种但非全部整合在宿主细胞的基因组中，然后利用SB转座子系统将所述慢病毒的gag、pol和rev基因的序列、病毒包膜蛋白的编码序列、以及携带目的核酸片段的病毒基因组转录盒序列中的剩余的一种或多种进一步整合在所述宿主细胞的基因组中；

优选地，利用SB转座子系统将慢病毒的gag、pol和rev基因的序列以及病毒包膜蛋白的编码序列整合在所述宿主细胞的基因组中，然后利用PB转座子系统将携带目的核酸片段的病毒基因组转录盒序列进一步整合在所述宿主细胞的基因组中，或者利用PB转座子系统将慢病毒的gag、pol和rev基因的序列以及病毒包膜蛋白的编码序列整合在所述宿主细胞的基因组中，然后利用SB转座子系统将携带目的核酸片段的病毒基因组转录盒序列进一步整合在所述宿主细胞的基因组中；

优选地，所述慢病毒的gag、pol和rev基因的序列、病毒包膜蛋白的编码序列、以及携带目的核酸片段的病毒基因组转录盒序列位于两个以上的构建体上，优选地，gag、pol基因的序列位于一个构建体上，rev基因的序列位于另一个构建体上，病毒包膜蛋白的编码序列位于第三个构建体上，并且携带目的核酸片段的病毒基因组转录盒序列位于第四个构建体上；

优选地，所述慢病毒的gag、pol和rev基因是HIV-1病毒的gag、pol和rev基因；

优选地，所述病毒包膜蛋白选自猫白血病病毒(RD114)包膜蛋白、两性逆转录病毒包膜蛋白、嗜性逆转录病毒包膜蛋白、狒狒猿白血病病毒包膜蛋白、尼帕病毒包膜蛋白、莫科拉病毒包膜蛋白、淋巴细胞脉络膜脑膜炎病毒包膜蛋白、基孔肯雅病毒包膜蛋白、罗斯河病毒包膜蛋白、塞姆利基森林病毒包膜蛋白、信德比斯病毒包膜蛋白、委内瑞拉马脑炎病毒包膜蛋白、西部马脑炎病毒包膜蛋白、流感病毒包膜蛋白、禽瘟病毒包膜蛋白、昌迪普拉病毒和皮里病毒包膜蛋白、猿免疫缺陷病毒包膜蛋白、猫免疫缺陷病毒包膜蛋白、马传染性贫血病毒包膜蛋白、埃博拉病毒包膜蛋白、狂犬病病毒包膜蛋白、杆状病毒包膜蛋白、丙型肝炎病毒包膜蛋白、猫内源反转录病毒包膜蛋白、麻疹病毒包膜蛋白、鼠白血病病毒的兼嗜性4070A和10A1、长臂猿白血病病毒的包膜蛋白、人免疫缺陷病毒的gp120和水疱性口炎病毒的糖蛋白(VSV-G)，更优选是水疱性口炎病毒的糖蛋白(VSV-G)；并且

优选地，所述SB系统中使用的转座酶是SB100X，和/或所述PB系统中使用的转座酶是ePiggyBac。