[发明专利]一种人类腺病毒通用核酸检测试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种人类腺病毒通用核酸检测试剂盒，其中包括提取人腺病毒DNA的提取液、PCR反应液、该反应液包括13μM Taq DNA聚合酶50μL、150μM dNTP 100μL、SyBr染料200μL、15μM尿嘧啶糖基化酶50μL，人类腺病毒阳性对照品、阴性对照品；PCR反应体系为20μL，包括PCR反应液15μL、引物2μL以及样品DNA 3μL，PCR反应液中用于DNA扩增反应的引物序列如下：P1：5’‑ACATCGCCGGACAGGATGCTTCGGAGTACC‑3’；P2：3’‑CACCCGCTGTTGTCTCACGACCTATACCGG‑5’。该人类腺病毒通用核酸检测试剂盒及方法具有很好的特异性，可以检测出人类腺病毒，检测方法成熟，快速，而且准确，为检测人类腺病毒提供可靠的实验依据。

技术领域

本发明属于病毒检测技术领域，具体涉及一种人类腺病毒通用核酸检测试剂盒及方法。

背景技术

人腺病毒(Human adenoviruses，HAdV)属于腺病毒科，是一群分布广泛的DNA病毒，可分为A～F六个亚种，共51个血清型。腺病毒是无包膜病毒，在低pH值环境下可稳定存在，有很强的耐物理和化学试剂的作用的能力，腺病毒可对胃肠分泌物和胆汁产生耐受，因此腺病毒可在胃肠内复制，产生很高的病毒载量。腺病毒常在咽、结膜、肠道及淋巴组织内繁殖，并导致各种各样的临床症状，比如呼吸系统的感染、结膜炎、胃肠炎、肝炎、出血性膀胱炎、神经系统的紊乱等。不同的腺病毒亚种会引起不同的疾病，如人腺病毒C亚种主要引起小儿科的上呼吸道感染，人腺病毒B亚种常在成年人中引起流行，人腺病毒B和E亚种是军营人员感染的主要病因，人腺病毒F亚种会引起感染性腹泻。腺病毒在有免疫力的宿主体内感染是温和的，而且具有自限性。腺病毒可通过人、水、媒介物和器械传播，室温条件下，腺病毒在污物中存在周期可延长至3周。腺病毒在儿童和军营人员中更易发生感染和大规模流行，大多数婴幼儿在出生后的5年内至少感染过1种腺病毒株。在过去的几年中，腺病毒作为主要的病原体在免疫功能低下宿主如艾滋病人、免疫遗传缺陷的患者、骨髓接受者、固体器官和造血干细胞移植者中常引起高发病率和死亡率；儿科经受同种型干细胞移植的病人，其感染腺病毒后死亡率可高达60％。一些致命的感染常由腺病毒血清型1、2、3引起，在这些病人体内常会出现细菌、真菌等微生物共感染的情况。艾滋病人感染腺病毒会产生肺炎、肝炎、脑膜软化、肾炎、胃肠炎等并发症。因此能够及时确诊何种病因致病，做到早发现早治疗，减少病情恶化，故早期诊断极为重要。

对腺病毒的检测依赖于疾病的类型和所获取的标本，确诊腺病毒的存在可采用病毒的细胞培养、抗原测定和基因组检测等技术。尽管细胞培养仍然是HAdV的金标准，但其对临床标本不敏感，且比较慢，易受细菌和真菌的污染。抗原检测常用来直接检测腺病毒在呼吸道和胃肠道的感染，较快速且灵敏度较高。所以需要一款快速、准确的人类腺病毒通用核酸检测试剂盒及方法来解决上述问题，满足人们的需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种人类腺病毒通用核酸检测试剂盒及方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种人类腺病毒通用核酸检测试剂盒，其中包括提取人腺病毒DNA的提取液、PCR反应液、人类腺病毒阳性对照品、阴性对照品；

PCR反应液中用于DNA扩增反应的引物序列如下：

P1：5’-ACATCGCCGGACAGGATGCTTCGGAGTACC-3’；

P2：3’-CACCCGCTGTTGTCTCACGACCTATACCGG-5’。

优选的，该反应液包括13μM Taq DNA聚合酶50μL、150μM dNTP 100μL、SyBr染料200μL、15μM尿嘧啶糖基化酶50μL。

优选的，PCR反应体系为20μL，包括所述PCR反应液15μL、所述引物2μL以及样品DNA3μL。

优选的，PCR反应循环参数为：