[发明专利]一种狂犬病疫苗的纯化方法

说明书

本发明公开了一种狂犬病疫苗的纯化方法，包括采用含有硅羟基的硅化合物载体进行吸附纯化，以及在狂犬病疫苗病毒液中加入带有碱金属离子的缓冲液。本发明不仅解决了狂犬病疫苗以往在生产过程中单一采用柱层析方法DNA难去除、蛋白质容易聚合沉淀的问题或者依赖于添加非限制性核酸内切酶、鱼精蛋白等化合物对疫苗安全性有影响的问题，在保证疫苗效价的前提下，针对现有的去除宿主DNA方法的不足，本采用物理吸附的方式纯化狂犬病疫苗中的宿主DNA，将二氧化硅入特制的滤器中，加入收获液进行过滤纯化。通过硅化物对DNA的特异性吸附作用，在可接受的抗原回收率下，可以从狂犬病疫苗中吸附宿主DNA，对断裂的宿主DNA也有吸附能力，对疫苗的安全性没有影响。

技术领域

本发明涉及疫苗生产的提纯方法，具体是一种狂犬病疫苗的纯化方法。

背景技术

狂犬疫苗的生产需要经过Vero细胞培养、病毒增殖、病毒收获、纯化等过程，其中Vero细胞具有无限传代的能力，具有整合入接种者基因组、成为癌变的潜在诱发条件的风险，因此《中国药典》中对其DNA在狂犬疫苗中的浓度限制较为严格。作为狂犬疫苗中主要的杂质之一，Vero细胞DNA一般产生于细胞培养时的机械搅拌、病毒增殖造成的细胞凋亡及破碎等过程。出于安全性考虑，《中华人民共和国药典规定》，经杂交法检测狂犬疫苗DNA含量合格标准为100pg/mL。但是经检测，中间产品DNA含量可高达10000pg/mL，单纯依靠柱层析法纯化不仅成本增加、抗原损失量大，而且纯化效果不理想。去除宿主DNA成为狂犬病疫苗(Vero细胞)生产纯化的难题。

现有的专利公开了以鱼精蛋白和非限制性核酸内切酶为主的DNA去除法，如专利CN 101270350 A，但是两种试剂和成本高并且这些措施意味着在狂犬病疫苗中引入了新的杂质，且鱼精蛋白的加入会大大降低病毒抗原的含量，病毒回收率仅为20～30％，不仅提高了潜在的安全性风险和生产过程中纯化的难度还提高了疫苗生产的成本。

而针对其他的采用离子交换介质去除狂犬疫苗的已公开专利，如CN 103571800B，DNA去除率为99％，但工艺复杂，抗原回收率仅为50％左右。大大提高了疫苗生产的成本。

因此本发明的目的为采用物理吸附的方式吸附狂犬疫苗中的残留Vero细胞DNA，使其与疫苗中间产品分离，达到去除宿主DNA的目的。该方法简便、操作便捷、更符合大规模生产的需要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种狂犬病疫苗的纯化方法，以解决现有技术中的工艺复杂，回收率低，导致的疫苗生产成本较高的技术难题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种专利名称狂犬病疫苗的纯化方法，具体纯化步骤包括：采用含有硅羟基的硅化合物载体进行吸附纯化，以及在狂犬病疫苗病毒液中加入带有碱金属离子的缓冲液。

与现有技术相比，上述技术方案的有益效果是：

在保证疫苗效价的前提下，针对现有的去除宿主DNA方法的不足，上述技术方案采用物理吸附的方式纯化狂犬病疫苗中的宿主DNA，在疫苗纯化过程中加入含有硅羟基的硅化合物载体，对收获液进行过滤纯化。通过硅化物对DNA的特异性吸附作用，在可接受的抗原回收率下，可以从狂犬病疫苗中吸附宿主DNA，对断裂的宿主DNA也有吸附能力，对疫苗的安全性没有影响；另外，在保证疫苗不引入新的化学杂质的情况下，采用物理方法有效吸附去除宿主DNA的含量，提高疫苗产品质量及合格率，为疫苗纯化提供新方法。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。