[发明专利]一种大丽花外植体表面灭菌方法

说明书

本发明提供一种大丽花外植体表面灭菌方法，其特征在于：采集4月份大丽花当年生健康花托，用洗衣粉清洗灰尘后在自来水流水中冲洗30min。转入无菌室后，在超净工作台上，用70％的乙醇溶液将花托消毒15‑30s，再用无菌水冲洗2‑3次，每次1‑2min，然后用0.1％的氯化汞溶液消毒8‑10min，随后再用无菌水反复冲洗3‑5次，每次1‑2min，用吸水纸吸干水分后，接种于培养基中。本发明所述的灭菌方法所得愈伤组织诱导率高，且污染率较低，操作相对简单，易于实现。相对于现有技术做出了改进，能够培养出理想的外植体，在组织培养中有良好的适应性，存活率高。

技术领域

本发明涉及一种植物外植体表面灭菌方法，属于植物组培技术领域。

背景技术

大丽花(Dahlia pinnata Cav.)，别名大理花、天竺牡丹、东洋菊、大丽菊、地瓜花等，属菊科、大丽花属植物，多年生草本，有巨大棒状块根。茎直立，多分枝，是欧美发达国家常见的草本花卉种类。由于其植株优美，花色花形誉名繁多，丰富多彩，对环境的适应性强，常出现在园林应用中。

大丽花繁殖传统上常采用扦插繁殖和分株繁殖。扦插繁殖世代变异大，难以保持原有品种的优良性状；分株繁殖系数低，无法满足产业化生产的要求。

本发明在参照前人研究的基础上，以幼嫩花托为外植体进行组织培养，以期快速实现大量种苗的供给。

发明内容

本发明的目的在于提供一种大丽花外植体表面灭菌方法，其优势在于所述的灭菌方法所得愈伤组织诱导率高，且污染率较低，操作相对简单，易于实现。

它包括如下步骤：

1)外植体的选择：采集4月份大丽花当年生健康花托；

2)外植体的预处理：用洗衣粉溶液清洗所述外植体表面污垢；

3)外植体的消毒：转入无菌室后，用70％的乙醇溶液和0.1％的氯化汞溶液对所述外植体进行消毒，即得。

本发明所述的灭菌方法，步骤1)外植体的选择，优选大丽花当年生健康花托作为外植体的健康植株。选择当年生健康花托作为外植体，有助于很快形成大量的愈伤组织，且污染率较低，且易形成丛芽，芽健壮，质量高，是较理想的外植体材料。

本发明所述的灭菌方法，步骤2)外植体的预处理，采用浓度为10-20ppm的洗衣粉溶液清洗外植体表面污垢，然后用自来水冲洗干净。

本发明所述的灭菌方法，步骤3)外植体的消毒，转入无菌室后，在超净工作台上，用70％的乙醇溶液将花托消毒15-30s，再用无菌水冲洗2-3次，然后用0.1％的氯化汞溶液消毒8-10min，随后再用无菌水反复冲洗3-5次，用吸水纸吸干水分后，接种于培养基中。

每次消毒后都要用无菌水冲洗，以彻底除去氯化汞。消毒和涮洗时都要充分搅拌，保证材料各部分与消毒剂或无菌水充分接触。优选用无菌水涮洗3-5次，每次不少于2min。

外植体经无菌水涮洗后，需用吸水纸将水分吸干，之后接种于培养基中。

消毒操作在无菌室超净工作台进行。

本发明提供的外植体的灭菌方法，相对于现有技术做出了改进，能够培养出理想的外植体，在组织培养中有良好的适应性，外植体可以很快的形成大量的愈伤组织，且污染率较低，同时易形成丛芽，芽健壮，质量高。

具体实施方式

下面结合本发明的植物组培消毒方法的应用实例，说明本发明的具体实施方式。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

1.消毒器皿准备：

选取250ml塑料组培瓶，清洗干净，高压蒸汽消毒备用。

2.消毒剂的准备：