[发明专利]一种测定烟草中蛋白质含量的方法

说明书

本发明提供一种测定烟草中蛋白质含量的方法，将待测定烟草形成粉末，然后与水混合形成悬浮液，悬浮液放入透析袋并坐浴于缓冲液中进行透析，对透析后的悬浮液干燥去除水分后获得预处理烟草粉末，再对预处理烟草粉末利用凯氏定氮法对透析后样品中的蛋白质进行测定。本发明中公开的测定烟草中蛋白质含量的方法，将透析技术与凯氏定氮法相结合，开发出了一种简便、高效的测定方法，为烟草蛋白质的研究应用提供一种新的测定方法。

技术领域

本发明涉及再造烟叶领域，特别是涉及一种测定烟草中蛋白质含量的方法。

背景技术

烟草中含有大量的蛋白质，烟草中蛋白质对烟叶品质具有两个方面影响：第一、蛋白质是烟株生长的主要营养物质，亦是烟株生长发育过程中维持机体活力的重要物质基础。烟叶中的蛋白质功能分为两大类，一类为结构蛋白，一类为酶蛋白，二者在烟株的生长发育阶段对烟叶影响烟叶品质的有机营养物质的代谢转化与积累具有重要的影响。第二、成熟烟叶中的蛋白质是烟叶中的重要化学成分，其含量的高低与烟草的品质息息相关，往往蛋白质含量过高会导致烟草吸味呈现焦糊羽毛味，增加烟气的刺激性，因此评价烟叶的品质需要准确测定蛋白质的含量。

目前，主要用于烟草中蛋白质含量测定的方法主要有凯氏定氮、流动分析、以及水解测定氨基酸含量等方法，这些方法中凯氏定氮法测定的是总有机氮的含量，烟草中的烟碱等生物碱、以及氨基酸会影响蛋白质含量的分析，导致测定值偏高；而流动分析方法也存在类似的影响，尤其是溶解性较差的游离氨基酸、以及酸性水溶蛋白等会影响测定值。水解氨基酸的方法先测定游离氨基酸的含量，再水解后测定氨基酸总量，通过差值计算蛋白质含量，该方法操作繁琐、费时费力，因此需要开发一种，操作简便、准确测定烟草中蛋白质含量的分析方法。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种测定烟草中蛋白质含量的方法，用于解决现有技术中烟草中蛋白质测定方法存在的操作繁琐、费时费力以及测定准确度不到的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明是通过以下技术方案获得的。

本发明提供一种测定烟草中蛋白质含量的方法，将待测定烟草形成粉末，然后与水混合形成悬浮液，悬浮液放入透析袋并坐浴于缓冲液中进行透析，对透析后的悬浮液干燥去除水分后获得预处理烟草粉末，再对预处理烟草粉末利用凯氏定氮法对透析后样品中的蛋白质进行测定。

根据上述所述的方法，所述粉末的大小为60～80目。

根据上述所述的方法，所述透析袋的截留分子量为100～5000。

根据上述所述的方法，所述缓冲液为水或磷酸二氢钠与磷酸氢钠的水溶液。

根据上述所述的方法，所述水的加入量为待测定烟草粉末质量的至少1倍。

根据上述所述的方法，所述缓冲液的pH在2.40～8.00。本申请中通过pH值控制非蛋白氨基酸以及有机胺的离子状态，有利于更有效的透析出这些测定蛋白时的干扰物质。

根据上述所述的方法，所述透析的时间不超过36h，优选为6～36h，更优选地，所述透析的时间为6～12h。

根据上述所述的方法，所述透析在搅拌条件下进行。

根据上述所述的方法，所述干燥为冷冻干燥。

本发明中公开的测定烟草中蛋白质含量的方法，将透析技术与凯氏定氮法相结合，开发出了一种简便、高效的测定方法，为烟草蛋白质的研究应用提供一种新的测定方法。其先利用透析袋将烟草梗膏中的生物碱、游离氨基酸等含氮小分子去除，再用凯氏定氮法对烟草中的总氮量进行测定，最后折算成蛋白质含量，该方法能够排除非蛋白氮对测定的影响，实现更准确分析蛋白质的含量，以及操作方便，适用于烟草中的蛋白质含量分析。

具体实施方式