[发明专利]一种高纯度重楼皂苷Ⅶ的制备方法及质量控制方法

权利要求书

1.一种重楼皂苷Ⅶ的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）取云南重楼、华重楼或多叶重楼的干燥果壳，粉碎，用乙醇回流提取，提取液滤过，合并滤液，回收乙醇，得浸膏；

2）浸膏用1～1.5倍体积的蒸馏水混悬后，再依次经石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，静置，合并正丁醇层，浓缩得正丁醇萃取物；

3）正丁醇萃取物经硅胶柱色谱，用氯仿-甲醇系统梯度洗脱，收集含重楼皂苷Ⅶ的流分；

4）流分用薄层色谱法检测后合并，浓缩，即得纯度为重量含量80～90％的重楼皂苷Ⅶ粗结晶；

5）将重楼皂苷Ⅶ粗结晶用高效制备液相色谱法分离纯化，收集重楼皂苷Ⅶ组分；

6）对所收集的每一份洗脱液利用高效液相色谱法检测，将保留时间相同且纯度为90～98%的重楼皂苷Ⅶ合并，并将保留时间相同且纯度大于98%的重楼皂苷Ⅶ合并，分别进行减压浓缩，即可得到纯度为90～98%及纯度大于98%的重楼皂苷Ⅶ；

所述步骤1）中乙醇的加入量为药材重量的5～20倍，乙醇浓度为70～90%，回流提取次数为3～8次，每次1～3 h；

步骤3）所述的梯度洗脱条件为：0～A分钟，洗脱系统为氯仿-甲醇，二者比例为100:1～20:1；A～B分钟，洗脱系统为氯仿-甲醇，二者比例为5:1～3:1；所述A为90～160，所述B为120～200；

步骤4）所述的薄层色谱法参数如下：

薄层板：硅胶G；

三种展开剂系统：系统一，氯仿-甲醇-甲酸体积比为3:1:0.1，系统二，正丁醇-乙酸-水体积比为4:1:5，上层溶液，系统三，氯仿-甲醇-水体积比为65:35:10，下层溶液；

点样：用甲醇制成1 mg/mL的溶液，在同一硅胶G板上，按不同的点样量梯度点样，点样量分别为20 μg、40 μg、60 μg、80 μg、100 μg；置展开缸分别展开，展距为15 cm；

定位：喷以10%硫酸乙醇溶液，晾干，在105 ℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视；结果在薄层色谱中，可见橙红色的单一斑点，三种展开剂系统，5个不同浓度的梯度点样，均为单一斑点，未见杂质斑点；

步骤5）所述高效液相制备色谱法的参数如下：色谱柱为C-18柱，乙腈-水为流动相洗脱，两者体积配比为55～75：25～45，流速为5～10 mL/min，检测波长为203～210 nm，柱温为25～35 ℃；

所述步骤6）的高效液相色谱法具体为：

色谱柱：C-18，4.6×250 mm，5 μm；流速：0.8～1.2 ml/min；进样量：10～20 μl；面积归一化法定量；系统条件为以下三个条件的其中之一：

条件一：流动相为乙腈-水，两者体积配比为35～40:60～65，检测波长203 nm；

条件二：流动相为甲醇-水，两者体积配比为75～80:20～25，检测波长210 nm；

条件三：流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液，两者体积配比为60～80:20～40，检测波长203～205 nm；

所述的重楼皂苷Ⅶ的制备方法，所得重楼皂苷Ⅶ采用高效液相色谱法检测纯度大于98％。

2.权利要求1所述的重楼皂苷Ⅶ的制备方法，应用于从七叶一枝花的其他变种中提取重楼皂苷Ⅶ。