[发明专利]基因测序仪的短接头、双index接头引物和双index建库体系

权利要求书

1.一种短接头，其特征在于，包括两条部分互补的接头寡核苷酸链：

接头寡核苷酸链1，由5’端到3’端依次包括index2引物结合区、正义接头互补区、正义分子标签和1个突出的碱基T；所述index2引物结合区的长度为15-42bp，所述正义接头互补区长度为8bp，所述正义分子标签的长度为2-10bp；所述正义接头互补区全部或部分与index2引物结合区的3’末端序列重合；

接头寡核苷酸链2，由5’端到3’端依次包括与接头寡核苷酸链1中的正义分子标签反向互补的反义分子标签、与接头寡核苷酸链1正义接头互补区反向互补的反义接头互补区和index1引物结合区；所述反义分子标签长度为2-10bp，所述反义接头互补区长度为8bp，所述index1引物结合区长度为15-30bp；所述反义接头互补区全部或部分与index1引物结合区的5’末端序列重合。

2.根据权利要求1所述的短接头，其特征在于，接头寡核苷酸链2的5’端磷酸化修饰；优选的，所述短接头为Y型短接头。

3.一种双index接头引物，其特征在于，包括正向接头引物和反向接头引物；

正向接头引物，由5’端到3’端依次包括GF引物序列、index2序列和index2引物结合区序列；

反向接头引物，由5’端到3’端依次包括GR引物序列、index1序列、index1引物结合区反向互补序列。

4.根据权利要求3所述的双index接头引物，其特征在于，所述index1序列和index2序列的长度均为8-10bp；所述index1序列和index2序列相同或不同；优选的，所述index1序列和index2序列选自表1。

5.一种双index接头封阻序列，其特征在于，包括正向接头封阻序列和反向接头封阻序列；

正向接头封阻序列，由5’端到3’端依次包括正义接头互补区反向互补序列、index2引物结合区反向互补序列、index2序列反向互补序列和GF引物序列反向互补序列；正义接头互补区反向互补序列全部或部分与index2引物结合区反向互补序列5’末端序列重合；

反向接头封阻序列，由5’端到3’端依次包括GR引物序列、index1序列、index1引物结合区反向互补序列和反义接头互补区反向互补序列；所述反义接头互补区反向互补序列全部或部分与index1引物结合区反向互补序列5’末端序列重合。

6.根据权利要求5所述的双index接头封阻序列，其特征在于，所述index1序列和index2序列反向互补序列的长度均为8-10bp；所述index1序列和index2序列反向互补序列相同或不同。

7.根据权利要求5或6所述的双index接头封阻序列，其特征在于，正向接头封阻序列的3’端磷酸化修饰；反向接头封阻序列的3’端磷酸化修饰。

8.一种双index文库结构，其特征在于，包括利用权利要求1或2所述的短接头和/或权利要求3或4所述的双index接头引物制备而成。

9.一种双index建库体系，其特征在于，包括权利要求1或2所述的短接头、权利要求3或4所述的双index接头引物和/或权利要求5-7任一项所述的双index接头封阻序列。

10.一种双index探针杂交捕获体系，其特征在于，包括权利要求5-7任一项所述的双index接头封阻序列。

11.一种文库构建方法，其特征在于，包括利用权利要求1或2所述的短接头、权利要求3或4所述的双index接头引物和/或权利要求5-7任一项所述的双index接头封阻序列。

12.一种测序方法，其特征在于，包括利用权利要求8所述的文库结构。

13.根据权利要求12所述的测序方法，其特征在于，测序平台为Gene⁺Seq 2000、Gene⁺Seq200或DNBSEQ-T7。