[发明专利]一种高效的百香果花粉离体萌发液体培养基及培养方法

说明书

本发明提供一种高效的百香果花粉离体萌发液体培养基及培养方法，属于种子培养技术领域，所述液体培养基包括所述液体培养基中包含蔗糖、PEG4000、硼酸、Ca(NO₃)₂·4H₂O。培养基的组分简单、制作时无需调节pH值。本发明还提供了所述百香果花粉离体萌发的培养方法。培养后的花粉萌发率高、培养时间短。

技术领域

本发明属于种子培养技术领域，具体是一种高效的百香果花粉离体萌发液体培养基及培养方法。

背景技术

百香果花粉是百香果的雄配子体，是参与授粉受精过程的重要元件，萌发率高的花粉是授粉受精成功的前提，是获得百香果产量及杂交育种成功的基础。目前检测百香果花粉离体萌发的培养基及培养方法效率低，花粉的萌发率也较低，不能准确的反应花粉的真实活力。现有技术中百香果花粉在离体培养基中很难发芽，在适用于多数作物花粉的BK培养基(10％蔗糖，0.01％H₃BO₃，0.03％Ca(NO₃)₂·4H₂O，0.02％MgSO₄·7H₂O，0.01％KNO₃，其余为H₂O)中，培养24小时，发芽率在6.1％以下。有研究表明在15％蔗糖，0.03％Ca(NO₃).4H₂O,0.02％Mg(SO₄).7H₂O,0.01％KNO₃,0.01％H₃BO₃,+0.8％琼脂其余为H₂O，pH 7.0的培养基中，百香果花粉的发芽率也仅为32.92％。还有在BK培养基的基础上调整蔗糖的浓度，并添加的PEG3350，PH值调整为6.0，紫百香果(No.127)在20％蔗糖，10％PEG3350，0.01％H₃BO₃，0.03Ca(NO₃)₂·4H₂O，0.02％MgSO₄·7H₂O,0.01％KNO₃的培养基中萌发率最高为49.1％。台农一号自交代在20％蔗糖，15％PEG3350，0.01％H₃BO₃，0.03％Ca(NO₃)₂·4H₂O，0.02％MgSO₄·7H₂O,0.01％KNO₃的培养基中萌发率为32.0％；食用种百香果最适培养基组合浓度则为20％蔗糖，15％PEG3350，0.01％H₃BO₃，0.03％Ca(NO₃)₂·4H₂O，0.02％MgSO₄·7H₂O,0.01％KNO₃萌发率为54.0％。在培养基中添加百香果柱头组织，紫百香果(No.127)花粉的萌发率可达89％，但在食用种百香果中则有抑制作用，其花粉萌发率由54.0％降低为35.7％。究其原因，受到花粉萌发亲和性的影响，柱头中所含的物质对有的品种的花粉体外萌发具有促进作用，对有的品种花粉萌发反而起到抑制的作用。另外，由于聚乙二醇PEG和琼脂加热形成浑浊沉淀物，因此百香果花粉体外萌发实验只能通过液体培养基培养，但在使用凹槽载玻片培养花粉的过程中，随着时间的延长花粉聚集在凹槽载玻片的最低处，在显微镜观察花粉萌发情况时带来不便。

现有百香果花粉离体萌发技术不能真实的反应百香果花粉的萌发率，因此，现需研究一种百香果花粉离体萌发的液体培养基及离体花粉的培养方法，以在较短时间下提高百香果花粉的离体培养萌发率。

发明内容