[发明专利]一种基于ELISA的PirB抑制剂筛选模型及其应用

说明书

本发明公开的一种基于ELISA的PirB抑制剂筛选模型及其应用，包括：步骤1，建立初步PirB抑制剂筛选模型；在96孔板中包被PirB胞外段PEP，随后加入待测药物和biotin‑Aβ孵育；去除反应液加入辣根氧化酶标记链霉亲和素，室温反应去除HRP‑SA，在每孔中继续加入四甲基联苯胺底物溶液TMB显色，显色结束后加入终止液终止反应，用酶标仪测定每个孔在波长为450nm时的吸光值，得到初步PirB抑制剂筛选模型；步骤2，验证初步PirB抑制剂筛选模型可靠性。本发明一种基于ELISA的PirB抑制剂筛选模型，能快速准确的检测出逆转阿尔兹海默症的药物，具有信噪比高，使用安全，样品消耗量小的特点。

技术领域

本发明属于药理学技术领域，具体涉及一种基于ELISA的PirB抑制剂筛选模型，本发明还涉及一种于ELISA的PirB抑制剂筛选模型的应用。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease，AD)，是一种中枢神经系统神经退行性疾病。AD的病因至今未明，除衰老之外，β淀粉样蛋白(amyloidβ，Aβ)聚集、tau过度磷酸化、慢性炎症及神经元死亡都被认为是AD的主要病因。随着人口老龄化增加，AD的发病率逐年上升，预计至2050年，AD患者人数将会超过1亿。

配对免疫球蛋白样受体B(paired immunoglobulin-like receptor B，PirB)是一种I型跨膜糖蛋白，由胞外六个免疫球蛋白样的结构和胞内包含有的四个免疫受体蛋白样酪氨酸依赖的抑制基序的多肽组成。

PirB最早作为免疫抑制性受体发现于免疫细胞，介导机体炎症和免疫反应。最新研究发现：PirB是Aβ寡聚体的受体，参与调节AD的突触可塑性。PirB可通过其胞外段前2个胞外免疫球蛋白(Ig)结构域D1、D2区与Aβ结合，亲和力可达纳摩尔级。LilrB2与Aβ结合后可介导的突触毒性和cofilin或蛋白磷酸酶通路，最终导致细胞骨架和轴突形态异常。因此，PirB可以成为AD治疗的一个新靶点。开发小分子PirB抑制剂，抑制Aβ与内源性PirB结合，阻断PirB介导的Aβ毒性反应，实现促进轴突再生和提高突触可塑性的目的，可能成为一种逆转AD病程的新策略。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种基于ELISA的PirB抑制剂筛选模型的建立方法，提供了一种筛选逆转阿尔茨海默病药物的新途径。

本发明的第二个目的是提供一种基于ELISA的PirB抑制剂筛选模型的应用。

本发明所采用的第一个技术方案，一种基于ELISA的PirB抑制剂筛选模型的建立方法，包括以下步骤：

步骤1，基于ELISA原理，建立初步PirB抑制剂筛选模型；

在96孔板中包被PirB胞外段PEP，随后加入待测药物和biotin-Aβ孵育；去除反应液后，加入浓度为0.5μg/ml的辣根氧化酶标记链霉亲和素HRP-SA，室温反应去除HRP-SA，在每孔中继续加入四甲基联苯胺底物溶液TMB显色，显色结束后加入终止液终止反应，用酶标仪测定每个孔在波长为450nm时的吸光值，得到初步PirB抑制剂筛选模型；

步骤2，验证步骤1中的初步PirB抑制剂筛选模型可靠性。

本发明的特征还在于，

biotin-Aβ的浓度为5-100nM。

PEP浓度为0.05μg/ml-100μg/ml。

步骤2具体为：

当步骤1中待测药物的Z因子不小于0.5时，证明初步PirB抑制剂筛选模型可靠，得到最终的PirB抑制剂筛选模型。

本发明所采用的第二个技术方案，一种基于ELISA的PirB抑制剂筛选模型在治疗阿尔茨海默病药物中的应用。