[发明专利]制备检测sST2/Gal3双指标免疫层析试剂盒

说明书

本发明具体涉及建立一种同时检测可溶性ST2(sST2)和β‑半乳糖凝集素‑3(Galectin3，Gal3)免疫层析试剂盒，主要成分为免疫层析试纸条，由PVC底板上依次粘附Fusion5、硝酸纤维素膜和吸水纸组成。其中Fusion5吸附有sST2抗体‑微球和Gal3抗体‑微球，硝酸纤维素膜固定sST2抗体形成检测线1(T1线)，固定Gal3抗体形成检测线2(T2线)，固定抗IgG抗体形成质控线(C线)。本发明同时公开了sST2抗体和Gal3抗体偶联微球过程。本发明建立sST2/Gal3免疫层析试剂盒，同时检测血液或其他体液中sST2和Gal3浓度，用于诊断心肌炎及监测心肌炎的进展。

技术领域

本发明属于免疫学领域，具体涉及制备出sST2抗体-荧光微球和Gal3抗体-荧光微球，建立sST2/Gal3免疫层析试剂盒过程。

背景技术

心肌炎(Myocarditis)是损伤心肌的炎症反应，影响心肌收缩力和心脏电传导系统，降低心脏泵血能力或导致心律失常，引发心力衰竭，也是引发儿童或年轻人突然和意外死亡的主要原因之一。病毒感染是引发心肌炎的主要原因，其次药物诱发心肌炎症反应。心肌炎患者症状从流感样病症到扩张性心肌病变和心力衰竭。

目前，没有筛查或诊断心肌炎特异性生物标志物，确诊心肌炎的黄金标准是通过心脏活检，检证心肌组织损伤和炎症反应存在，但不同心肌部位受到损伤和炎症程度不同，活检可能会错过损伤或炎症部位，心脏活检方法不够敏感，阳性率仅达30％，需要寻找诊断心肌炎的新方法。

目前研究发现，检测血液中可溶性ST2(sST2)和β-半乳糖凝集素-3(Galectin3，Gal3)水平可作为诊断心肌炎生物标志物。

ST2有两个主要同型异构体，即跨膜受体型ST2L和可溶型sST2，ST2是白细胞介素-33(IL-33)的受体，受到损伤心肌细胞分泌IL-33到血液中，IL-33通过与跨膜受体型ST2L结合后，IL-33能有效地阻断由血管紧张素II或苯肾上腺素诱导的心肌肥大，可减少心肌纤维化，细胞凋亡，改善心肌功能。在心肌细胞损伤或炎症情况下，强烈诱导ST2基因表达sST2并分泌到血循环中，sST2能与ST2L竞争，高效地结合 IL-33，从而阻断了IL-33/ST2L系统信号传导，消除IL-33心脏保护作用，促进心肌损伤或炎症进展，可发展到心力衰竭。血循环中高水平sST2代表心肌细胞损伤或炎症反应并持续恶化。

动物实验发现，病毒感染引发小鼠心肌炎，与未受感染健康小鼠心脏相比，心肌炎小鼠心脏中表达sST2水平增高，血液中sST2水平提高，检测小鼠血液中sST2水平可用于判定小鼠心肌炎的发生。

在临床研究中，检测血液中sST2水平，与健康对照组相比，50岁以下男性心肌炎患者血液中sST2水平显著升高，表明血液中sST2水平作为诊断心肌炎的新指标。

Gal 3由201氨基酸组成，分子量为30kD，由N-端富含脯氨酸、甘氨酸和酪氨酸结构区域和C-端糖识别区域(Carbohydrate Recognition Domain，CRD)构成。Gal3在多种组织器官中均有表达，主要由活化巨噬细胞产生和分泌。Gal3通过CRD连接到不同的配体上，发挥广泛的生物学功能，参与调节细胞增殖及分化，抑制细胞凋亡，介导细胞黏附，细胞活化和趋化作用。Gal3能介导心肌中的巨噬细胞、肥大细胞浸润，促进细胞释放介质，使单核细胞的趋化性增强，刺激单核巨噬细胞及纤维细胞增殖并分泌原骨胶原I，形成不可逆的相互结合胶原蛋白，从而导致心肌纤维化形成，增加心肌间质、血管周围纤维化及心脏胶原沉积，引起心肌肥厚、心肌顺应性减弱而导致心力衰竭发生。由此可见，Gal3在心肌炎症反应过程中起重要作用。