[发明专利]含有Hdac3突变的载体及其在基因治疗肿瘤中的应用

说明书

本公开提供一种含有Hdac3突变的载体及其在基因治疗肿瘤中的应用。具体来说，本公开涉及一种表达盒，含有所述表达盒的重组载体和重组腺相关病毒。与此同时，本公开还涉及含有上述成分的药物组合物、载体及其应用，并且进一步提供了缓慢持续杀伤细胞的方法。本公开提供的载体具有良好地抑制肿瘤的效果。

技术领域

本公开属于生物技术领域。具体来说，本公开涉及含有Hdac3突变的载体及其在基因治疗肿瘤中的应用。

背景技术

肿瘤疾病是影响人类健康的重要疾病之一，长时间以来一直困扰着人们，每年在全球都有成千上万的人死于癌症^[1]。科学工作者们也一直在探索寻求良好的治疗方案，探索癌症发生发展的原因。目前的肿瘤治疗方案有手术切除，化疗放疗以及免疫治疗方法等等，这些肿瘤治疗方法都是比较成熟并且有一定效果的治疗方法。

近几年，在肿瘤治疗方面，肿瘤免疫治疗方法有了突飞猛进的发展，也在肿瘤的治疗上取得了丰硕的成果。比如PD-1，CTLA-4等免疫检测点抑制剂的发现与相关抗体在临床上的应用^[2,3]。癌症患者在使用免疫检测点的阻断剂以后，会激活机体的抗肿瘤免疫。但是，抗体药物的毒副作用也比较大，通常会引起患者的自身免疫疾病以及机体的炎症反应。

随着研究的深入，科研工作者发现表观遗传学在癌症治疗中发挥着巨大的作用，应用表观遗传学的原理，对肿瘤细胞内某个基因的调控(比如组蛋白去乙酰化酶3，histonedeacetylase 3，Hdac3)^[4]，使肿瘤细胞内的信号通路发生变化，增强肿瘤细胞的免疫原性，以此来激活免疫系统，从而达到杀伤肿瘤细胞和治疗癌症的目的^[5,6]。

近些年，科研工作者们发现溶瘤病毒在肿瘤治疗方面发挥巨大作用，其中腺相关病毒(AAV)就是一种非常好的病毒，腺相关病毒是无包膜的，游离的和拥有溶解性的dsDNA的病毒。

AAV独特的特征在于，其作为例如在基因治疗中将外源DNA递送至细胞的载体具有吸引力。培养中细胞的AAV感染是非细胞病变的，並且人类及其他动物的自然感染是沉默的及无症状的。而且，AAV感染许多哺乳动物细胞，允许活体內靶向许多不同组织的可能性。而且，AAV转导缓慢分裂和非分裂细胞，并且可以作为转录活性核附加体(染色体外元件)基本上持续这些细胞的寿命。AAV原病毒基因组作为质粒中的克隆DNA 具有感染性，这使得重组基因组的构建成为可能。此外，由于指导AAV复制、基因组衣壳化和整合的信号包含在AAV基因组的ITR中，因此部分或全部内部约4.3kb的基因组 (编码复制和结构衣壳蛋白，rep-cap)可以用如含有启动子、感兴趣的DNA和多腺苷酸化信号的基因盒等外源DNA替代。rep蛋白和cap蛋白可以以反式提供。AAV的另一个显著特征是其是极其稳定且强健的病毒。它易于承受用于灭活腺病毒的条件(56℃到65℃，持续数小时)，使AAV的冷保存不太重要。甚至可以将AAV冻干。最后，AAV感染的细胞不耐受重复感染。

与此同时，腺相关病毒具有广泛的组织嗜性，属于用于基因治疗和溶瘤的研究最深入的病毒载体。腺相关病毒除了具有强大的裂解活性外，在药理应用方面还具有许多显着优势。腺相关病毒基因组易于进行基因操作。在病毒制造方面，腺相关病毒可以高滴度产生，并且颗粒具有优异的物理化学稳定性^[7]。关于腺相关病毒的临床适用的安全性方面，它的肿瘤选择性复制已被认为是，它可以有效防止腺相关病毒对非靶标的健康组织过度损伤^[8]。

但是，在临床上，现有的肿瘤治疗方案有手术切除肿瘤，化疗或放疗治疗，肿瘤免疫学治疗方案(免疫检测点阻断，比如PD-1抗体在临床上的应用)。但是，这些治疗方案在临床上面都有或多或少的问题，无法满足病人希望得到良好治疗的希望。例如，手术切除治疗，存在切除不彻底的现象；化疗或放疗治疗方案，牵一发而动全身，对病人的身体伤害比较大；免疫检测点阻断的治疗方式，所使用的免疫检测点阻断的抗体药物，其毒副作用比较大，通常会引起患者的自身免疫疾病以及机体的炎症反应。