[发明专利]牛细粒棘球蚴病时间分辨荧光免疫层析检测试纸条及其制备方法

说明书

本发明实施例公开了一种牛细粒棘球蚴病时间分辨荧光免疫层析检测试纸条及其制备方法，属于生物检测技术领域。所述试纸条的结合垫上包被有时间分辨荧光微球标记的小鼠IgG抗体和Kazal‑type serine protease inhibitor domain‑containing protein抗原，所述检测线上包被有Kunitz protease inhibitor protein抗原，所述质控线上包被有山羊抗小鼠IgG二抗。本发明的试纸条操作简便，有很好的敏感性和准确性，可以替代ELISA、胶体金等诊断方法无法在现场操作且准确性低的弊端，同时还具有良好的特异性，为牛细粒棘球蚴病的流行病学调查和该疾病的诊断提供了一种快速的诊断方法。

技术领域

本发明实施例涉及生物检测技术领域，具体涉及一种牛细粒棘球蚴病时间分辨荧光免疫层析检测试纸条及其制备方法。

背景技术

细粒棘球蚴病(包虫病)为一种严重的全球性的人畜共患病，人或反刍动物主要通过误食了细粒棘球绦虫排出的虫卵而发病，被称为“虫癌”。截止到现在，我国依旧将该病列为重点防控和主要防护的动物疫病之一。

目前，关于细粒棘球蚴病诊断技术的研究投入较少，最常用的诊断方法是解剖查看虫体。随着分子技术和免疫技术的发展，现在有分子诊断，比如LAMP，免疫学诊断，如ELISA试剂盒法、胶体金等，但从临床应用发现，这些检测方法的准确性不高、方便性不强，无法便于基层工作者操作检测。

虽然，细粒棘球蚴病在人类诊断方面已有很多研究，但在诊断动物方面的研究甚少，且动物在自然感染该病时，抗体反应不明显，易导致诊断错误。因此建立一种高效、准确、特异性好且简便的动物细粒棘球蚴的免疫诊断技术至关重要。

层析技术结合了免疫标记和免疫层析的特点，以时间分辨荧光微球作为示踪物，制备免疫层析试纸条，克服了胶体金免疫层析(胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种免疫标记技术)灵敏度相对偏低，且只能用于定性或半定量检测的缺点；也克服了其他免疫学方法(如ELISA法)的不方便性、不准确性。

发明内容

为此，本发明提供一种牛细粒棘球蚴病时间分辨荧光免疫层析检测试纸条及其制备方法，以解决现有技术检测方法存在的准确性不高、方便性不强等问题。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

根据本发明实施例的第一方面，本发明实施例提供了一种牛细粒棘球蚴病时间分辨荧光免疫层析检测试纸条，包括PVC底板、以及依次设置在所述PVC底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述结合垫上包被有时间分辨荧光微球标记的小鼠IgG抗体和Kazal-type serine protease inhibitor domain-containingprotein抗原，所述硝酸纤维素膜上设有间隔开的检测线和质控线，检测线上包被有Kunitzproteaseinhibitorprotein抗原，质控线上包被有山羊抗小鼠IgG二抗。

进一步地，所述Kazal-type serine protease inhibitor domain-containingprotein抗原是如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，编码所述Kazal-type serine proteaseinhibitor domain-containing protein抗原的基因是如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

进一步地，所述Kunitz protease inhibitorprotein抗原是如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列，编码所述Kunitz protease inhibitor protein抗原的基因是如SEQ IDNO.4所示的核苷酸序列。

进一步地，所述Kazal-type serine protease inhibitor domain-containingprotein抗原和Kunitz protease inhibitorprotein抗原的制备方法：