[发明专利]一种用于末段DNA片段处理的试剂及其制备方法

权利要求书

1.一种用于末段DNA片段处理的试剂，其特征在于，所述试剂主要成分为蛋白酶K、表面活性剂、离液剂、DNA切割剂和蒸馏水，具体制备方法如下：

S1、将50-100mmol/L的Tris-HCl溶液和1-2mmol/L的醋酸钙溶液按体积比1：1混合，然后加入蛋白酶K配制成蛋白酶K浓度为10-20mg/mL的溶液一；

S2、将表面活性剂溶于蒸馏水中，配制成质量浓度为5-10％的溶液二；

S3、将离液剂溶于蒸馏水中，配制成浓度为3-6mol/L的溶液三；

S4、将DNA切割剂溶于蒸馏水中，配制成浓度为1-5μg/L的溶液四；

S5、将溶液一、溶液二、溶液三和溶液四按体积比1：3-5：2-5：1-2混合，得到一种用于末段DNA片段处理的试剂；

所述表面活性剂的具体合成步骤如下：

SS1、氮气保护下，将三聚氯氰和甲苯加入反应瓶中，搅拌至三聚氯氰完全溶解，降温至0-5℃，将脂肪胺溶于甲苯中，并滴入反应瓶中，滴毕向反应瓶中加入碳酸钠的去离子水溶液，搅拌反应3-5h，得到中间体一,反应方程式如下：

SS2、氮气保护下，将中间体一与丙酮加入反应瓶中，搅拌至中间体一完全溶解，加热至40-50℃，将氨基乙磺酸溶于去离子水中，并加入碳酸钠，将氨基乙磺酸溶液滴入反应瓶中，搅拌反应4-6h，得中间体二，反应方程式如下：

SS3、将中间体二加入反应瓶中，并加入乙二醇、四丁基溴化铵和去离子水，将反应液降温0-10℃，加入氢氧化钾，搅拌并加热至90-100℃，反应6-10h，得表面活性剂，反应方程式如下：

所述DNA切割剂的具体制备方法如下：

第一步，将三乙烯四胺和无水乙醇加入反应瓶中，冷却至0-5℃，将对苯二甲醛溶于乙醇中，配制成0.5mol/L的对苯二甲醛乙醇溶液，将对苯二甲醛乙醇溶液加入反应瓶中，升温至30-40℃搅拌反应10-16h，将反应液减压蒸出溶剂，然后经洗涤、干燥、重结晶得到配体；

第二步，将配体与氯化铜分别溶于无水乙醇中，搅拌下将氯化铜的乙醇溶液滴入配体的乙醇溶液中，加热至60-70℃反应2-5h，冷却过滤，滤饼干燥后得DNA切割剂。

2.根据权利要求1所述的一种用于末段DNA片段处理的试剂，其特征在于，步骤SS1中所述三聚氯氰和脂肪胺的摩尔比为1：1-1.5，碳酸钠溶液的浓度为2mol/L，每克三聚氯氰加入10-20mL甲苯和10-15mL碳酸钠溶液，脂肪胺为正己胺、正辛胺、十二胺和十四胺中的一种。

3.根据权利要求1所述的一种用于末段DNA片段处理的试剂，其特征在于，步骤SS2中所述中间体一、氨基乙磺酸和碳酸钠的摩尔比为1：0.9-1.5：1-1.5，每克氨基乙磺酸加去离子水20-40mL，每克中间体一加丙酮5-15mL。

4.根据权利要求1所述的一种用于末段DNA片段处理的试剂，其特征在于，步骤SS3中所述中间体二、乙二醇、四丁基溴化铵和氢氧化钾的摩尔比为1：0.5-0.8：0.005-0.01：1-1.5，每克中间体二加入5-12mL水。

5.根据权利要求1所述的一种用于末段DNA片段处理的试剂，其特征在于，所述离液剂选自硫氰酸胍、硫氰酸钠、盐酸胍、碘化钠和尿素中的一种。

6.根据权利要求1所述的一种用于末段DNA片段处理的试剂，其特征在于，第一步中所述三乙烯四胺与对苯二甲醛的摩尔比为1：1-1.2，每克三乙烯四胺使用8-15mL无水乙醇，第二步中所述配体与氯化铜的摩尔比为1：0.9-1.1,每克配体所用无水乙醇为8-12mL，每克氯化铜所用无水乙醇为8-12mL。