[发明专利]一种检测非小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞EGFR基因突变的试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供了一种检测非小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞EGFR基因突变的试剂盒及检测方法，属于分子生物学技术领域。该试剂盒包括稀释液、脱色液、染色液A、染色液B、EGFR（小鼠）一抗、山羊抗小鼠IgG/HRP、0.1%Triton X‑100、0.3%H₂O₂、试剂A、试剂B、6×PBS缓冲液。）本发明提供的检测方法，不用穿刺活检获取组织标本即可检测到晚期或复发非小细胞肺癌患者EGFR表达情况。该技术属于微创，并能够实时检测，能够避免染色过程中可能产生的边缘效应导致的假阳性结果，稳定性好，降低细胞的损失，提高检测的准确性。

技术领域

本发明提供了一种检测非小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞EGFR基因突变的试剂盒及检测方法，属于分子生物学技术领域。

背景技术

肺癌是导致癌症患者死亡的主要恶性肿瘤之一，在我国，肺癌的发病率和死亡率均居第一位。非小细胞肺癌（NSCLC）约占全部肺癌的85%，而这其中超过70%的NSCLC患者在确诊时已为晚期。尽管手术和放化疗等治疗技术不断提高，NSCLC患者5年生存率仍低于20%，主要死因包括局部复发与远处转移。

循环肿瘤细胞（Circulating tumor cell，CTC）是从实体肿瘤脱落进入外周血液循环的肿瘤细胞，自1989年被发现以来，目前已有多种方法用于外周血循环肿瘤细胞的检测。近期研究表明，其检测对于评估肿瘤患者尤其是晚期肿瘤患者的预后以及选择合适的个体化治疗具有重要的临床意义。因CTC检测具有微创、实时检测等特点，被称为肿瘤的“液态活检”。

随着分子生物学的发展，近年来以表皮生长因子受体（epidermal growth factorreceptor，EGFR）为靶点的分子靶向治疗已成为NSCLC一种新的治疗方案，尤其对于晚期（失去了手术机会）或手术后复发的NSCLC患者。EGFR是一种跨膜蛋白，为非小细胞肺癌患者术后靶向药物资料等提供了中药的依据以及治疗靶点。针对EGFR的靶向治疗主要包括抗体类药物和小分子酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinaseinhibitors，TKIs），这两类药物的作用机制主要在于抑制受体的活性，因此针对不同EGFR受体亚型（野生型和各种突变体），其疗效显著不一。研究证实，EGFR基因发生突变是NSCLC 患者接受TKIs治疗获益的前提。目前，国内外NSCLC诊治指南均认为：NSCLC患者EGFR突变检测的时间点包括初诊时及争取在疾病进展时再次检测，应通过重复检测减少假阳性和假阴性。而目前临床实践中，NSCLC患者EGFR检测的标本主要为肿瘤组织，来源于手术或穿刺活检，很难做到多次或实时检测。

目前，山东省第一医科大学、山东省药物研究院联合山东祺欣生物科技有限公司、山东喻晓生物科技有限公司、济南杏恩生物科技有限公司、山东发现生物技术有限公司等单位，对于循环肿瘤细胞检测鉴定关键技术进行产业化推广的研究，本项目为山东省重大科技创新工程项目，本项目将以山东第一医科大学济南校区的山东省药物研究院为核心，落实注册人制度，依托循环肿瘤细胞检测鉴定核心诊断技术，进一步注册鉴定诊断试剂盒，以包括PD1、PD-L1、ER、PR、Her-2、GPC-3、VEGF、P53、Vimentin、TKI-EGFR、RAS、CK、ALK-D5F3、CD20、ALK/EML4、Beta-catenin、E-Cadherin、EP-CAM、HPV、IDH-1、PSA、PSMA、VEGF、GFAP、细胞角蛋白、AE1/AE3、雌激素受体、孕激素受体、BCA-225、CA 125、CEA、EMA、ERCC1、HPV、Ki-67、P53、TOP2A等作为CTCs表达的示踪剂，注册超灵敏、超快速、高覆盖、低成本、准确特异的鉴定诊断试剂盒，通过与在济南注册的山东祺欣生物科技有限公司、山东喻晓生物科技有限公司、济南杏恩生物科技有限公司、山东发现生物技术有限公司合作进行产业化推广。

发明内容