[发明专利]一种致病性大肠杆菌非靶向挥发性代谢物的富集和检测方法及其应用

权利要求书

1.一种致病性大肠杆菌非靶向挥发性代谢物的富集和检测方法，其特征在于，是采用微孔聚合物/聚多巴胺复合材料固相微萃取探针进行富集，采用全二维气相色谱-飞行时间质谱联用仪进行检测，所述的固相微萃取探针的表面涂层为微孔聚合物/聚多巴胺复合材料，所述复合材料是通过微孔聚合物的选择性孔内聚多巴胺修饰策略合成得到；

该方法包括以下步骤：将培养菌体的玻璃瓶置于孵化器中震摇，孵化器温度设定为30～50℃，孵化器震摇时间为40～80min，震摇完成后使用微孔聚合物/聚多巴胺复合材料固相微萃取探针戳入菌体培养瓶中的顶空部位萃取，戳入菌体培养瓶的深度为10～20mm，萃取时间为40～80min，萃取完毕后，将探针插入GC×GC-TOF-MS进样口中脱附和分析；所述的GC×GC-TOF-MS检测条件为：电离能量为70eV、传输线温度为280℃、离子源温度为200℃、质谱四级杆温度为150℃、扫描模式为全扫描、载气为氦气、载气流速为1.7mL/min、进样口温度为250℃、进样口设置为不分流模式，柱箱温度设置如下：初始温度为50℃，保持1分钟，以5℃/min的速度升温到260℃，保持2分钟，总分析时间为45分钟，调制周期为7秒；

所述的微孔聚合物/聚多巴胺复合材料固相微萃取探针的表面涂层的长度为1～2cm，厚度为5～50μm，所述的固相微萃取探针的制备步骤具体为如下：

S1：在氮气保护下，加入无水FeCl₃作为催化剂，加入二甲氧基甲烷作为外交联剂，以1,3,5-三苯基苯作为聚合单体，于搅拌和加热状态下，通过烷基化反应在不同温度下完成初级交联和超交联反应，合成具有双峰微孔分布的微孔聚合物，反应完成后收集并洗涤产物，干燥即得微孔聚合物；所述的无水FeCl3、二甲氧基甲烷和1,3,5-三苯基苯的质量比为(4～6):(2～3):(1～2)；初级交联反应温度为40～50℃，反应时间为4～6h；超交联反应温度为60～100℃，反应时间为18～30h；

S2：于搅拌状态下，将具有双峰微孔分布的微孔聚合物、多巴胺盐酸盐、三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液和超纯水混合均匀，多巴胺选择性在微孔聚合物表面和较小的孔隙中发生自聚反应，反应完毕后，离心收集产品、干燥即得所述微孔聚合物/聚多巴胺复合材料；所述的微孔聚合物和多巴胺盐酸盐的质量比为(8～12):(3～5)；所述的三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液的浓度为8～12mM，pH值为7～10，所述的三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液和超纯水的体积比为(3～5):(14～18)；所述的微孔聚合物和多巴胺盐酸盐的总质量与三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液和超纯水的总体积的混合比例是11～17g/34～46mL；反应温度为室温，反应时间为18～30h；

S3：将不锈钢丝伸入粘合剂溶液中，取出并吸干不锈钢丝表面的粘合剂溶液，然后在其表面均匀涂覆微孔聚合物/聚多巴胺复合材料并干燥，重复数次使涂层厚度达到要求，最后在惰性气体氛围下老化即得所述固相微萃取探针；所述的粘合剂溶液为硅酮胶/邻二甲苯溶液，所述硅酮胶/邻二甲苯溶液中硅酮胶的质量浓度为0.2～0.8g/mL。

2.权利要求1所述的致病性大肠杆菌非靶向挥发性代谢物的富集和检测方法在致病性大肠杆菌非靶向挥发性代谢物分析检测中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的致病性大肠杆菌包括肠出血性大肠埃希氏菌EHEC、肠产毒性大肠埃希氏菌ETEC、肠道聚集性大肠埃希氏菌EAEC、肠道侵袭性大肠埃希氏菌EIEC或肠道致病性大肠埃希氏菌EPEC。