[发明专利]一种调控CPEB3基因表达的方法

说明书

本发明涉及一种调控CPEB3基因表达的方法，涉及生物技术领域。本发明的调控CPEB3基因表达的方法包括：步骤1、利用生物信息学软件预测CPEB33'UTR序列，预测到hsa‑miR‑4638‑3p可以结合至CPEB33'UTR序列；步骤2、构建CPEB3双荧光素酶报告载体；步骤3、hsa‑miR‑4638‑3p与步骤2最终提取的质粒DNA共转染细胞；步骤4、对步骤3的共转染细胞进行Lucifersae检测；步骤5、进行统计学数据分析。本发明的调控CPEB3基因表达的方法确定了hsa‑miR‑4638‑3p和CPEB3的靶向调控关系，为进一步研究它们在蒽环类药物心脏毒性作用及分子机制奠定了实验基础。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种调控CPEB3基因表达的方法。

背景技术

miRNA是一类大小约为22个核苷酸的内源性非编码小RNA。研究表明，miRNA通过与其靶基因mRNA的结合，影响基因的转录、蛋白质的合成等，参与众多生物学过程，影响动物的生长发育。虽然，到目前为止，科学工作者已经发现了许多的miRNA分子，也对它们的作用有了一定的了解，但是，仍有许多关于基因与miRNA的未解之谜。要解决这些问题，最简捷有效的方法便是从研究和发现更多的miRNA及其靶基因入手，以miRNA与其靶基因之间的关系作为研究方向，进行生物学功能验证，以便让我们更多了解生物的生命意义。

胞质聚腺苷酸化物结合蛋白(Cytoplasmic poly(A)denylation elementbinding protein,CPEB)家族是一种序列特异性的RNA结合蛋白，最早发现于非洲爪蟾的卵母细胞中，调控非洲爪蟾卵母细胞发育过程中母源性mRNA的多聚腺苷酸化和翻译。CPEB蛋白家族有CPEB1、CPEB2、CPEB3和CPEB4等4个成员，其中CPEB2～4在起源上较为接近，而CPEB1则与其他家族成员起源较远，CPEB3在脑和心脏中均有表达。CPEB蛋白家族通过调控多种信号通路在多种疾病发生发展中扮演着重要的作用，如突触传递作用、海马依赖的神经功能异常、结肠癌与宫颈癌的发生，其不同家族成员及调控其作用的miRNA均可作为疾病诊断及治疗的新靶点，但其参与蒽环类药物心脏毒性的具体分子生物学机制仍有待进一步深入研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种调控CPEB3基因表达的方法，该方法确定了hsa-miR-4638-3p和CPEB3的靶向调控关系，为进一步研究它们在蒽环类药物心脏毒性作用及分子机制奠定了实验基础。

为了实现上述目的，本发明的技术方案具体如下：

本发明提供一种调控CPEB3基因表达的方法，该方法是通过hsa-miR-4638-3p调控CPEB3基因表达的方法。

在上述技术方案中，优选的是：所述hsa-miR-4638-3p的结合位点为Position177-183 of CPEB3 3'UTR、Position 1357-1364 of CPEB3 3'UTR、Position 4433-4440of CPEB3 3'UTR中的任意一个或者多个。

在上述技术方案中，优选的是：通过hsa-miR-4638-3p调控CPEB3基因表达的方法，具体包括以下步骤：

步骤1、利用生物信息学软件预测CPEB3 3'UTR序列，预测到hsa-miR-4638-3p可以结合至CPEB3 3'UTR序列；

步骤2、构建CPEB3双荧光素酶报告载体；

步骤3、hsa-miR-4638-3p与步骤2最终提取的质粒DNA共转染细胞；

步骤4、对步骤3的共转染细胞进行Lucifersae检测；

步骤5、进行统计学数据分析。

在上述技术方案中，进一步优选的是：步骤1中生物信息学软件为TargetScanHuman 7.1和/或miRDB。