[发明专利]一种乙基硫酸酯人工抗原、制备方法及应用

权利要求书

1.一种乙基硫酸酯半抗原，其特征是，其具有如式(Ⅰ)所示的结构：

2.一种乙基硫酸酯人工抗原，其特征是，其具有如式(Ⅱ)所示的结构：其中，p为载体蛋白，n表示一个载体蛋白上偶联的半抗原的个数；n的取值范围为5～100；

所述载体蛋白选自牛血清白蛋白、牛γ球蛋白、牛甲状腺球蛋白、钥孔血蓝蛋白和鸡卵清白蛋白中的任意一种。

3.一种制备乙基硫酸酯半抗原的方法，其特征在于，该方法用于制备权利要求1所述的半抗原，包括如下步骤：

将2-氨基乙醇硫酸氢酯加入反应容器中，然后再加入N,N-二甲基甲酰胺、碳酸钾、2-(4-(溴甲基)苯基)乙酸，室温下搅拌反应2-24小时；反应结束后，蒸干溶剂，用薄层色谱法纯化，得到乙基硫酸酯半抗原；其中，2-氨基乙醇硫酸氢酯：2-(4-(溴甲基)苯基)乙酸＝1:1～1:4，此比例为物质的量之比。

4.一种制备乙基硫酸酯人工抗原的方法，其特征在于，该方法用于制备权利要求2所述的乙基硫酸酯人工抗原，包括如下步骤：

(1)乙基硫酸酯半抗原的制备：

将2-氨基乙醇硫酸氢酯加入反应容器中，然后再加入N,N-二甲基甲酰胺、碳酸钾，2-(4-(溴甲基)苯基)乙酸，室温下搅拌反应2-24小时；反应结束后，蒸干溶剂，用薄层色谱法纯化，得到乙基硫酸酯半抗原；其中，2-氨基乙醇硫酸氢酯：2-(4-(溴甲基)苯基)乙酸＝1:1～1:4，此比例为物质的量之比；

(2)乙基硫酸酯人工抗原的制备：

a.称取乙基硫酸酯半抗原于另一反应容器中，加入N,N-二甲基甲酰胺，再加入N-羟基琥珀酰亚胺和N,N-二环己基碳二亚胺，室温搅拌反应过夜，反应结束后离心，取上清液记为A液；其中，乙基硫酸酯半抗原：N-羟基琥珀酰亚胺：N,N-二环己基碳二亚胺＝1:1:1～1:7:7，此比例为物质的量之比；

b.制备pH为7.2～7.4的PBS缓冲液；

c.称取载体蛋白溶于步骤b中所述的PBS缓冲液中，得到的溶液记为B液；B液中，载体蛋白浓度为2-20mg/ml；

d.搅拌下，将A液滴加到B液，得到的混合液在4℃条件下静置过夜，得到乙基硫酸酯人工抗原混合液；A液：B液＝(1～5000):1000，此比例为体积比；

e.将乙基硫酸酯人工抗原混合液移入透析袋中，用步骤b中的PBS缓冲液透析，透析结束后，离心取上清液即得到乙基硫酸酯人工抗原。

5.一种抗体，其特征在于，该抗体是采用权利要求2中所述的乙基硫酸酯人工抗原免疫动物而获得。

6.根据权利要求5所述的抗体，其特征在于，所述抗体为单克隆抗体或者多克隆抗体。

7.一种抗体在检测酒驾中的应用，其特征在于，所述抗体为权利要求6所述的抗体。