[发明专利]养颜护肤干细胞因子纳米脂质体制剂制备方法

说明书

本发明公开了养颜护肤干细胞因子纳米脂质体SCE制剂制备方法，包括以下步骤：间充质干细胞复苏与培养；在离心管中加入间充质干细胞培养基，将保存干细胞的冻存管投入水浴中，平摇直至细胞完全融化，再将细胞悬浮液缓慢逐滴至离心管中，一次离心后吸掉上清液，使用间充质干细胞培养基轻轻地重悬细胞，将细胞悬浮液缓慢移至预先加入间充质干细胞培养基的培养瓶中，放于增养箱内，进行传代培养。本发明可以避免细胞因子丧失活性，能够通过脂质体和表皮细胞膜更好的融合，提高穿透细胞膜的能力，直接作用于皮肤真皮层，起到更好作用，能够更好的改善皮肤微环境，促进原有皮肤干细胞活性和功能。

技术领域

本发明涉及细胞生物学技术领域，尤其涉及养颜护肤干细胞因子纳米脂质体制剂制备方法。

背景技术

干细胞目前已经在健康及临床上体现出显著优势，同时，培养干细胞产生的副产品上清液也含有干细胞分泌的大量细胞因子。目前已经证明，干细胞因子同样对于健康和疾病等方面具有显著应用价值。现在医学研究已经证实，细胞的健康更重要的取决于细胞因子所形成的微环境是否良好，良好健康的微环境，更加有利于干细胞的活性和功能，理论上来说，通过干细胞因子进行补充，改变细胞微环境，会有利于细胞功能的正常发挥，进而带来健康益处。目前对于干细胞因子的利用，仅仅有少数机构，只是通过一般技术把干细胞因子收集出来，直接添加入化妆品中，用于普通护肤使用，并且细胞因子极不稳定，在使用中很容易丧失活性，细胞因子无法透过皮肤角质层，进入更深层次，如达到真皮层，因此实际应用中，直接涂抹在皮肤表面不能真正起到抗衰老的作用，因此，很多医疗机构会结合仪器通过破损皮肤表皮角质层的方法使得药物被利用，但是这种有创伤的方式带来极大的应用限制；另一方面，直接提取的干细胞培养上清液含有大量其它成分，真正的干细胞因子浓度很低，而且和多种生物或化学因子混合在一起使用，既缺乏实际效果又增加过敏或者损伤健康的风险。

发明内容

基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了养颜护肤干细胞因子纳米脂质体制剂制备方法。

本发明提出的养颜护肤干细胞因子纳米脂质体制剂制备方法，包括以下步骤：

S1：间充质干细胞复苏与培养；在离心管中加入间充质干细胞培养基，将保存干细胞的冻存管投入水浴中，平摇直至细胞完全融化，再将细胞悬浮液缓慢逐滴至离心管中，一次离心后吸掉上清液，使用间充质干细胞培养基重悬细胞，将细胞悬浮液缓慢移至预先加入间充质干细胞培养基的培养瓶中，放于增养箱内，进行传代培养，酶消化后将细胞悬液全部移至离心管中，二次离心后收集上清液；

S2：细胞因子制备；将S1中收集的上清液，无菌分装高速离心管，三次离心后收集上清液，再将上清液转入30KD超滤管，四次离心后取滤出液，再将透析液通过1KD超滤膜，收集截留液，得到细胞因子浓缩液；

S3：脂质体制备；称取大豆卵磷脂和胆固醇，加乙醇并加热，充分溶解后移入烧瓶中，55℃减压旋转蒸发，使磷脂膜均匀覆盖在烧瓶侧壁，并使乙醇溶剂完全挥发，将生物蛋白包裹在脂质体中，采用微射流法，使脂质体粒径均匀，溶液逐渐变微蓝，再整粒除菌，将制得的细胞因子浓缩液加入去离子水或磷酸盐水溶液中，不断旋转振摇下摇匀得水溶液II，再将水溶液II加入烧瓶中，不断旋转振摇下得到脂质体乳液，使脂质薄膜充分水化，直至乳液变为透明，并过0.22um滤膜，得到载干细胞因子的脂质体制剂。

优选地，所述S1中，水浴为37℃水浴，间充质干细胞培养基为DMEM/F12无血清人脐带间充质干细胞培养基。

优选地，所述S1中，一次离心的具体步骤为：室温下300xg离心5min，二次离心的具体步骤为：无菌级操作间高速离心机4℃下1800xg离心8min。

优选地，所述S1中，增养箱条件为37℃、5％二氧化碳。

优选地，所述S1中，传代培养的具体步骤为：72h后换液，以后每隔48h换液一次，细胞长满至80％-90％，消化细胞，进行传代培养，选择P5代处于对数生长期的细胞。