[发明专利]具有增强抗原提呈细胞提呈抗原作用的壳聚糖衍生物纳米粒及制备

说明书

本发明属于海洋生物技术领域，具体涉及一种制备具有提呈抗原作用的高效免疫佐剂活性的壳聚糖纳米粒的方法。具体方法如下：将不同分子量不同取代位点的带有壳聚糖负电荷的衍生物和不同分子量季铵盐衍生物通过聚电解质复合法进行纳米粒的制备，筛选出具有一定免疫活性的纳米粒，且经过对树突细胞实验处理，表现出较好抗原提呈作用。为近年来壳聚糖作为免疫佐剂的研究提供一定的方法和理论指导。

技术领域

本发明属于海洋生物技术，具体涉及一种具有增强抗原提呈细胞提呈抗原作用的壳聚糖衍生物纳米粒及其制备方法。

背景技术

壳聚糖是自然界唯一带有正电荷的天然多糖，并由氨基葡萄糖和乙酰氨基葡萄糖通过β-1,4糖苷键连接而成。由于壳聚糖来源丰富，且安全无毒具有良好的生物兼容性，与人体细胞有良好的相容性，在食品医药，农业，材料科学领域具有很大的应用潜力。但壳聚糖本身难溶于水的特点限制了其应用与发展，对其进行衍生化修饰增加其溶解性等将使其应用更加广泛。纳米粒的研究是近年来研究热点之一，利用纳米粒作为药物载体是目前医学上多种药物的重要研究方向。壳聚糖本身具有较好的生物相容性，在生物体内无毒副作用能够被生物体所降解，而所制备出的纳米粒一方面发挥着载体作用，因此以壳聚糖为基础材料作为疫苗免疫佐剂的开发具有一定优势。佐剂的抗原提呈作用在疫苗发挥作用过程中十分重要，能够增强疫苗的免疫原性同时提高免疫效果。是检验一个材料能够作为免疫佐剂的标准之一。

发明内容

本发明考虑以上问题，提供一种具有增强抗原提呈细胞提呈抗原作用的壳聚糖衍生物纳米粒及其制备和应用。

为实现上述目的，本实验采用的技术方案为：

一种壳聚糖衍生物纳米粒，通过不同分子量不同取代位点的壳聚糖负电荷衍生物和不同分子量的壳聚糖正电荷衍生物，以聚电解质复合法获得粒径162.40nm-332.80nm、电位19.5mV-40.60mV的壳聚糖衍生物纳米粒；所述不同分子量的壳聚糖正电荷衍生物和不同分子量不同取代位点的壳聚糖负电荷衍生物按质量比为6.25-10：1-4的比例混合。

所述不同分子量不同取代位点的壳聚糖负电荷衍生物为不同分子量和不同取代位点的壳聚糖羧甲基化衍生物；不同分子量的壳聚糖正电荷衍生物为不同分子量壳聚糖季铵化衍生物；

所述不同分子量和不同取代位点的壳聚糖硫酸酯化衍生物为分子量范围为3k-1800kDa的N.O位取代、N位取代以及O为取代羧甲基壳聚糖；优选为分子量为180-200kDa的N.O位取代羧甲基壳聚糖，180-200K Da的N位取代羧甲基壳聚糖。

所述不同分子量壳聚糖季铵化衍生物为分子量范围为3k-1800kDa的2、3-环氧丙基三甲基氯化铵壳聚糖衍生物。优选为分子量为180-200kDa的壳聚糖季铵化衍生物。

一种壳聚糖衍生物纳米粒的制备方法，所述不同分子量不同取代位点的壳聚糖负电荷衍生物和不同分子量的壳聚糖正电荷衍生物，通过以聚电解质复合形成纳米粒子；其中，正电荷和负电荷衍生物按质量比为6.25-10：1-4的比例混合。

所述正负电荷衍生物在室温，以500r-700r磁力搅拌20-40min,过滤后得到纳米粒溶液，4℃保存。

一种壳聚糖衍生物纳米粒的应用，其特征在于：所述壳聚糖衍生物纳米粒在制备具有抗原提呈作用的疫苗免疫佐剂中的应用。

一种包裹抗原的免疫疫苗，疫苗佐剂为所述壳聚糖衍生物纳米粒，佐剂与抗原按质量比为0.5-2：1的比例混合。

进一步的说将不同分子量不同取代位点的壳聚糖负电荷衍生物与抗原混合均匀后，加入带不同分子量的壳聚糖正电荷衍生物，通过静电吸附作用制备包裹抗原的免疫疫苗。

所述抗原为能够引起机体免疫反应的物质，例如模式抗原OVA以及灭活病毒抗原。