[发明专利]一种同步硝化反硝化菌剂的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种同步硝化反硝化菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

一、包埋菌种悬浮液的制备：在厌氧条件下，将斜面保存的反硝化细菌菌种接种于活化培养基上培养18-24h，挑取活化培养基上的菌种，接种与发酵培养基上，在25-35℃的条件下陪养20-28h，获得扩大培养的反硝化细菌菌液或浓缩液。将菌液或浓缩液置于转速为3000～5000r/min下离心15min，倾去上清液，用生理盐水离心洗涤2-3次，再用生理盐水稀释至OD600值为0.3～0.5，于0～10℃封口贮藏备用。

活化培养基具体为液体LB培养基：蛋白胨10g/L，氯化钠5g/L，酵母粉10g/L，pH 7.0-7.2。

所述发酵培养基具体成分:

有机碳源5～30g/L，MgSO₄·7H2O0.1g/L，Na₂HPO₄·2H₂O7.9g/L，KH₂PO₄1.5g/L，KNO₃/KNO₂1～6g/L，微量元素1mL/L，调节pH至7.2附近，培养基使用之前经过灭菌处理。

二、菌种固定化小球的制备：将制得的细菌悬浮液按菌种悬浮液和包埋剂的体积比为1:(30-50)，加入包埋剂中，搅拌混合均匀，然后将混合液逐滴加入柠檬酸铁溶液交联剂中，在0-10℃下交联反应8-36h，再用蒸馏水洗净、干燥，得到球状的好氧反硝化菌剂；其中，包埋剂为含质量分数1-4％海藻酸钠和质量分数1-4％的β-环糊精混合液，将海藻酸钠和β-环糊精素加入水中，溶解、混合均匀、高温灭菌20min，冷却后获得。

2.根据权利要求1所述的一种同步硝化反硝化菌剂的制备方法，其特征在于：在步骤一中，所述反硝化细菌为厌氧反硝化菌。

3.根据权利要求1所述的一种同步硝化反硝化菌剂的制备方法，其特征在于：所述反硝化细菌菌液或浓缩液OD600值为0.3左右，封口冷藏温度低于4℃。

4.根据权利要求1所述的一种同步硝化反硝化菌剂的制备方法，其特征在于：在步骤二中，所述菌种悬浮液和包埋剂的体积比为1：(10-40)。

5.根据权利要求1所述的一种同步硝化反硝化菌剂的制备方法，其特征在于：在步骤二中，所述交联剂为柠檬酸铁溶液交联剂的质量浓度为2-4％。

6.根据权利要求1所述的一种同步硝化反硝化菌剂的制备方法，其特征在于：在步骤二中，所述小球状的好氧反硝化菌剂粒径为2～3mm。

7.根据权利要求1-6任意一项所述的一种同步硝化反硝化菌剂的制备方法制备得到的厌氧反硝化菌剂。

8.一种如权利要求7所述的同步硝化反硝化菌剂在反硝化方面的应用。