[发明专利]一种基于双机理的用于检测ONOO-的荧光探针及其制备方法和应用

说明书

一种基于双机理的用于检测ONOO^‑的荧光探针及其制备方法和应用，属于荧光探针检测技术领域，目的在于提供一种基于双机理测定ONOO^‑的荧光探针及其制备方法和应用。称取2‑氨基苯硫醇和4‑（二乙胺基）水杨醛溶解在10mL无水乙醇溶液中，然后加入浓盐酸和过氧化氢溶液。在室温下搅拌，加入10mL二次水进行淬灭，过滤得到粗产物，然后将粗产物在乙醇溶液中重结晶，得到黄色固体；将得到的固体、碳酸钾和4‑溴甲基苯硼酸频哪酯加入到DMF溶液中，反应5小时后，用旋转蒸发仪旋干，柱层析分离纯化后即得到目标产物。所得到的探针在水溶液中具有良好的溶解度和分散性，并且可以用来检测ONOO^‑和内源性细胞成像。

技术领域

本发明属于荧光探针检测技术领域，具体涉及一种基于双机理的用于检测ONOO^-的荧光探针及其制备方法和应用。

背景技术

ONOO^-是生物体内重要的活性氧分子，是由超氧阴离子(O₂^·-)和一氧化氮(NO)通过自由基反应生成的产物。ONOO^-作为较强的氧化剂和亲核试剂，参与了生物体内广泛的生理和病理活动过程，过量的ONOO^-将导致各种疾病的产生，如癌症，阿尔兹海默症和炎症等。因此，发展更多的荧光探针检测ONOO^-是极其重要的。但是目前的荧光探针大多是基于单机理测定，很少是通过双机理测定ONOO^-。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于双机理测定ONOO^-的荧光探针及其制备方法和应用，本发明的制备方法简单，通过该方法制备的荧光探针能够避免多种离子的干扰。

本发明采用如下技术方案：

一种基于双机理的用于检测ONOO^-的荧光探针，其结构式如下：

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一种基于双机理的用于检测ONOO^-的荧光探针的制备方法，包括如下步骤：

第一步，分别称取2-氨基苯硫醇和4-（二乙胺基）水杨醛，溶解在10mL无水乙醇溶液中，然后加入浓盐酸和过氧化氢溶液，在室温下搅拌1-2h后，加入10mL二次水进行淬灭，过滤得到粗产物，然后将粗产物在乙醇溶液中重结晶，得到黄色固体；

第二步，将第一步得到的黄色固体、碳酸钾和4-溴甲基苯硼酸频哪酯加入到DMF溶液中，60-80℃条件下反应5h，反应完毕后，旋转蒸发仪旋干，柱层析分离纯化后得到目标产物。

第一步中所述2-氨基苯硫醇和4-（二乙胺基）水杨醛的摩尔比为1-1.5:1，优选1.3:1，浓盐酸和过氧化氢溶液的体积比为1:2.5。第一步中所述搅拌时间优选90min。

第二步中所述黄色固体、碳酸钾和4-溴甲基苯硼酸频哪酯的摩尔比为0.5-1:2:1，优选0.8:2:1，所述反应温度优选60℃，柱层析用的洗脱剂体积比为10:1的二氯甲烷和甲醇。

一种荧光探针应用于ONOO^-的检测，包括如下步骤：

第一步，用DMSO配制1 mM的荧光探针的储备液，用二次水配置pH=7.4、浓度为0.02 M的磷酸缓冲溶液；

第二步，ONOO^-溶液的配置：将5 mL浓度0.6 M的亚硝酸钠溶液加入到5 mL浓度0.6 M的过氧化氢溶液中，用磁力搅拌器高速搅拌混合，然后迅速加入0.6 g氢氧化钠，反应2 min后，加入0.1 g的二氧化锰除去未反应完全的过氧化氢，冷冻保存；通过0.1 M的氢氧化钠溶液作为参比，测得ONOO^-溶液的浓度为0.2 mM；