[发明专利]一种嵌合抗原受体T细胞及其应用

权利要求书

1.一种嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体T细胞同时表达靶向CD19和PD-L1的嵌合抗原受体。

2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，所述CD19嵌合抗原受体包括：CD19抗原结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域和胞内共刺激信号传导结构域；

优选地，所述CD19抗原结合结构域包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；

优选地，所述CD19嵌合抗原受体的胞内共刺激信号传导结构域包括CD28胞内结构域、CD3ζ、TLR1、TLR2、4-1BB或CD27中的任意一种或至少两种的组合；

优选地，所述CD19嵌合抗原受体的胞内共刺激信号传导结构域包括4-1BB共刺激结构域和CD3ζ胞内信号传导结构域；

优选地，所述CD19嵌合抗原受体包括如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。

3.根据权利要求1或2所述的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，所述PD-L1嵌合抗原受体包括：PD-L1抗原结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域和胞内共刺激信号传导结构域；

优选地，所述PD-L1抗原结合结构域包括如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示的任意一种氨基酸序列，优选为SEQ ID NO.3；

优选地，所述PD-L1嵌合抗原受体的胞内共刺激信号传导结构域包括CD28胞内结构域、CD3ζ、TLR1、TLR2、4-1BB或CD27中的任意一种或至少两种的组合；

优选地，所述PD-L1嵌合抗原受体的胞内共刺激信号传导结构域包括CD28胞内结构域；

优选地，所述PD-L1嵌合抗原受体包括如SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列。

4.根据权利要求1-3任一项所述的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，所述CD19嵌合抗原受体和PD-L1嵌合抗原受体通过2A或IRES进行连接；

优选地，所述2A的氨基酸序列包括如SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列。

5.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体用于制备如权利要求1-4任一项所述的嵌合抗原受体T细胞；

优选地，所述表达载体包括编码CD19嵌合抗原受体的核酸分子、编码2A肽的核酸分子和编码PD-L1嵌合抗原受体的核酸分子；

优选地，所述编码CD19嵌合抗原受体的核酸分子包括如SEQ ID NO.10所示的核酸序列；

优选地，所述编码PD-L1嵌合抗原受体的核酸分子包括如SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12或SEQ ID NO.13所示的核酸序列。

6.根据权利要求5所述的表达载体，其特征在于，所述编码CD19嵌合抗原受体和编码PD-L1嵌合抗原受体的核酸分子共用一个启动子；

优选地，所述启动子为EF1α；

优选地，所述表达载体包括病毒载体；

优选地，所述病毒载体包括慢病毒载体、逆转录病毒载体或腺相关病毒载体中的任意一种，优选为慢病毒载体。

7.一种重组慢病毒，其特征在于，所述重组慢病毒采用如权利要求5或6所述的表达载体与包装辅助质粒共转染哺乳细胞制备得到；

优选地，所述哺乳细胞包括293细胞、293T细胞或293E细胞中的任意一种或至少两种的组合。

8.一种如权利要求1-4任一项所述的嵌合抗原受体T细胞的制备方法，其特征在于，所述方法包括将如权利要求5或6所述的表达载体或如权利要求7所述的重组慢病毒导入T细胞的步骤。

9.一种组合物，其特征在于，所述组合物包括如权利要求1-4任一项所述的嵌合抗原受体T细胞、如权利要求5或6所述的表达载体或如权利要求7所述的重组慢病毒中的任意一种或至少两种的组合。

10.一种如权利要求1-4任一项所述的嵌合抗原受体T细胞、如权利要求5或6所述的表达载体、如权利要求7所述的重组慢病毒或如权利要求9所述的组合物在制备治疗肿瘤的药物中的应用；

优选地，所述肿瘤为血液相关的肿瘤疾病；

优选地，所述血液相关的肿瘤疾病为白血病和/或淋巴瘤。