[发明专利]卵巢过度刺激综合征诊断标志物Kallistatin及其应用

说明书

本发明公开了一种卵巢过度刺激综合征检测标志物Kallistatin，同时还公开了Kallistatin蛋白在筛选和/或制备卵巢过度刺激综合征检测试剂中的应用以及一种卵巢过度刺激综合征检测试剂盒。本申请发明人经过研究发现卵巢颗粒细胞内存在Kallistatin的广泛表达，且细胞核内表达水平比细胞质内高。发明人首次发现，与进行辅助生殖的对照组相比，OHSS高危组的临床卵泡液标本和血清标本中，Kallistatin蛋白的表达明显下调；且与正常妊娠妇女相比，OHSS患者血清内Kallistatin的含量显著下调。提示Kallistatin可作为OHSS的一种特异性检测标志物，用于筛选和制备OHSS检测试剂盒，具有较好的灵敏度和特异性。本发明为OHSS的临床检测提供了一种新的特异性分子标志物，丰富了OHSS的临床检测方法。

技术领域

本发明属于生物技术和医学检测技术领域，具体涉及卵巢过度刺激综合征诊断标志物Kallistatin及其应用。

背景技术

卵巢过度刺激综合征(Ovarian hyperstimulation syndrome，OHSS)是与辅助生殖技术相关的医源性疾病，是控制性超排卵的主要并发症，严重的可威胁患者生命，应积极预防和治疗。OHSS以双侧卵巢多个卵泡发育、卵巢增大、毛细血管通透性异常、异常体液和蛋白外渗进入人体第三间隙为特征进而引起一系列的临床症状。通常发生于HCG扳机后或移植后的妊娠早期。OHSS临床上常常表现为恶心、呕吐、腹胀、少尿、体重增加和呼吸困难等，严重者可发生肝肾功能障碍甚至危及生命。目前临床上对OHSS的检测，主要有以下几种方式：1.体重增加、口渴、腹部不适、下腹稍肿胀、轻度恶心及呕吐等；2.B超显示：卵巢增大(直径5cm)，有多个黄体，可见腹腔少量积液；3.血细胞容积和白细胞计数升高，低钠、低蛋白血症；重度OHSS可出现肝功能不全(表现为肝细胞损害)和胆汁淤积，碱性磷酸酶、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、胆红素、肌酸激酶增高；4.疑诊OHSS者：主要作全血细胞分析、肝肾功能检查、水电解质测定、盆腔超声检查、体重测量、E2水平测定等；5.年龄、BMI、AMH值、AFC、不孕检测等基本信息和促排过程的雌激素水平、发育的卵泡数、获卵数等周期信息识别OHSS高危患者。

SERPINA3K是属于丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine proteinase inhibitor，Serpin)超家族的一员，又叫做激肽释放酶结合蛋白(kallikrin-binding protein,KBP)，是激肽释放酶-激肽系统(Kallikrein kinin system,KKS)的重要组成部分，由Chao J等人于1984年首次在人和大鼠的血浆中发现。SERPINA3K是第一个被发现的激肽释放酶抑制剂，它能与组织激肽释放酶特异性共价结合形成稳定的复合物，进而抑制其蛋白水解活性。SERPINA3K氨基酸序列在不同物种间有高度的同源性，在人体内它被称为Kallistatin(KS)，广泛表达于各个器官中，如肝脏、肾脏、视网膜、胰腺、睾丸、子宫、心肺、血管平滑肌细胞和内皮细胞等部位。

与其他丝氨酸蛋白酶抑制剂(如PEDF)一样，SERPINA3K也具有抑制血管增生的能力，是一种内源性的血管形成抑制因子。2002年Robert Q.Miao等通过体外细胞实验和体内动物实验首次发现SERPINA3K能够抑制亲血管因子VEGF和bFGF诱导的血管内皮细胞的增殖、迁移和粘附，进而起到抑制血管生成和肿瘤组织生长的作用。在低氧诱导的视网膜血管增生的大鼠模型中，研究者亦发现SERPINA3K能抑制血管增生和减轻血管渗漏，且作用呈剂量依赖性增强，此外，他们还发现SERPINA3K可以下调血管内皮细胞中VEGF的表达并阻止其与受体结合。有研究者以肝癌移植小鼠为动物模型，发现腹腔注射给予SERPINA3K可以抑制肿瘤的生长，降低瘤体组织新生血管的形成，通过抑制细胞核内HIF-1瘤基因的表达和转录进而下调VEGF的水平，同样，在胃癌移植模型小鼠中也观察到类似的结果。