[发明专利]一种百香果茎切面愈伤组织诱导分化成苗方法

权利要求书

1.一种百香果茎切面愈伤组织诱导分化成苗方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

（1）外植体采集与消毒；以成熟植株百香果茎为外植体，选择生长旺盛无病植株的新枝条，经自来水表面冲洗后，放在 1wt.% 次氯酸钠溶液浸泡 15 min，用自来水冲洗干净，放人体积分数75％酒精中灭菌 10 秒，再以0.1wt.％升汞灭菌5 ~ 6min，用无菌水冲洗 4 ~5 次；

（2）诱导培养；在无菌条件下将消毒过的枝条切成1.2 ~1.3cm的茎段直立插到诱导培养基中，每天连续光照8 h ，光照强度1000 ~1500 lx，培养温度21 ~27 ℃，培养130天；

（3）继代培养；诱导培养基上形成的小苗在无菌条件下切成带芽的茎段移接到生长培养基中，每天连续光照 12 h ，光照强度2 000 ~ 2500 lx，培养温度25±1 ℃，培养80天；

（4）瓶苗移植；继代培养的种苗生长到13cm，形成完整的根、茎、叶，用自来水把基部培养基冲洗干净，移植到土壤疏松基质中，浇透水盖上塑料膜保湿，在23-28℃条件下培养10天揭膜，苗圃阶段防止强光照，继续培养30-35天后待叶片长至6-7片，定植到大田。

2.根据权利要求1所述的一种百香果茎切面愈伤组织诱导分化成苗方法，其特征在于：所述诱导培养基为MS基本培养基中附加6-BA3.0m g/L、KT 0.5m g/L、NAA 1m g/L、IBA0.3m g/L和GA 0.5m g/L，白糖30g/L。

3.根据权利要求1所述的一种百香果茎切面愈伤组织诱导分化成苗方法，其特征在于：所述生长培养基为 3/5 MS 基本培养基中附加NAA 0.2m g/L、IBA 0.3m g/L 、碧益4m g/L、甘乐8m g/L、白糖20g/L、土豆50 g/L、活性炭2.0 g/L、蛋白胨1.0g/L 。

4.根据权利要求1所述的一种百香果茎切面愈伤组织诱导分化成苗方法，其特征在于：步骤（2）中诱导培养温度为白天27 ℃，晚上21℃。