[发明专利]两步法制备纳米多孔金及用于非小细胞肺癌耐药相关微小RNA(let-7a)检测

权利要求书

1.一种基于两步方波伏安法制备纳米多孔金膜修饰金电极并用于非小细胞肺癌耐药相关微小RNA(let-7a)检测的方法，其特征在于通过两步方波伏安法制备三维纳米多孔金（NPG）薄膜，构建电化学生物传感器，利用杂交前后硫堇分子电流强度的变化实现对目标基因序列microRNA的检测。

2.根据权利要求1所述的基于两步方波伏安法制备纳米多孔金膜修饰金电极并用于非小细胞肺癌耐药相关微小RNA(let-7a)检测的方法，其特征在于三维纳米多孔金的制备采用两步方波伏安法，且所述的目标基因序列为let-7a的完整序列，具有高度的时序性、保守性和特异性。

3.根据权利要求1或2所述的基于两步方波伏安法制备纳米多孔金膜修饰金电极并用于非小细胞肺癌耐药相关微小RNA(let-7a)检测的方法，依序包括如下步骤：（1）金电极预处理；（2）纳米多孔金膜修饰金电极的制备；（3）捕获探针(5'-SH -TTT TTA ACT ATA CAACCT ACT ACC TCA -3')的自组装及与目标微小RNA杂交；（4）在电化学DNA杂交指示剂硫堇溶液中富集；（5）带有探针的纳米多孔金膜修饰金电极在PBS缓冲液中，通过杂交前后硫堇电流强度的变化可检测目标微小RNA。

4.根据权利要求3 所述的基于两步方波伏安法制备纳米多孔金膜修饰金电极并用于非小细胞肺癌耐药相关微小RNA(let-7a)检测的方法，其特征在于制备的纳米多孔金膜修饰金电极，具有大的比表面积、良好的DNA负载能力、高导电及电催化能力，增强了该传感器的灵敏度。

5.根据权利要求3 所述的基于两步方波伏安法制备纳米多孔金膜修饰金电极并用于非小细胞肺癌耐药相关微小RNA(let-7a)检测的方法，单链DNA及DNA/RNA杂合体与硫堇分子结合的数量不同，根据杂交前后电流强度的差异检测目标微小RNA。

6.根据权利要求3 所述的基于两步方波伏安法制备纳米多孔金膜修饰金电极并用于非小细胞肺癌耐药相关微小RNA(let-7a)检测的方法，其特征在于金电极依次在1.0 μm、0.3 μm 和0.05 μm Al₂O₃粉末和水的混悬液打磨抛光至镜面，再先后用丙酮、无水乙醇、超纯水超声清洗；将超声好的金电极置于0.5 mol/L H₂SO₄ 溶液中进行电化学处理循环扫描至稳定，以除去表面上的可能的杂质，随后用超纯水超声清洗，氮气吹干备用；采用方波伏安法，设置方波伏安法的参数，初始电位为-0.8 V，终止电位为 2.5 V，电位增量为0.004V，振幅为0.025 V，频率为2 Hz，将洁净的金电极置于0.5 M H₂SO₄中反应；随后，其他参数不变，仅将方波伏安法的频率改为2000 Hz，将上述金电极置于0.5 M H₂SO₄中反应一次，即制得纳米多孔金膜修饰金电极。