[发明专利]检测2019-nCoV中orf1ab基因的RT-LAMP试剂盒及其专用引物和应用在审
| 申请号： | 202010271011.9 | 申请日： | 2020-04-08 |
| 公开（公告）号： | CN113493861A | 公开（公告）日： | 2021-10-12 |
| 发明（设计）人： | 袁静;闫超;崔晶花;李少丽;陈浪;薛冠华;赵汉青;冯燕玲 | 申请（专利权）人： | 首都儿科研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京三友知识产权代理有限公司 11127 | 代理人： | 韩蕾;周达 |
| 地址： | 100020 北京*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 2019 ncov orf1ab 基因 rt lamp 试剂盒 及其 专用 引物 应用 | ||
【说明书】：
本发明提供了一种检测2019‑nCoV中orf1ab基因的RT‑LAMP试剂盒及其专用引物和应用。本发明提供的用于检测2019‑nCoV即新型冠状病毒SARS‑CoV‑2的引物为引物组，其包括具有SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示序列的引物，能够实现对2019‑nCoV的特异性检测，本发明提供的RT‑LAMP试剂盒的检测操作简单、特异性强、灵敏度高，可以快速且高效对2019‑nCoV进行检测，可以用于基层医疗卫生单位和各疾病预防控制中心筛查和检测2019‑nCoV。
技术领域
本发明是关于生物技术领域中病毒的分子生物学检测方法，具体涉及一种用于检测2019-nCoV(或称为“2019新型冠状病毒”或“新型冠状病毒SARS-CoV-2”)中orf1ab基因的RT-LAMP检测专用引物和检测试剂盒及相关应用。
背景技术
2019年12月以来，新型冠状病毒SARS-CoV-2(或称为“2019-nCoV”或“2019新型冠状病毒”)感染的肺炎疫情已引起全球重视。针对SARS-CoV-2病毒的监测、检测相关技术已成为应对疫情的紧急重点研究方向之一。
冠状病毒的实验室诊断主要有血清学检测、核酸检测以及病毒分离。血清学检测灵敏度和特异性不如核酸检测高，在一些基层单位无法满足检测需要；病毒分离对环境要求高、周期长且影响因素多，不适宜在基层实验室开展；核酸检测主要有RT-PCR及Real-time RT-PCR，但需要特殊仪器，一些设备条件相对简陋的基层单位无法进行。
发明内容
本发明的一个目的在于提供一种用于检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的引物。
本发明的另一目的在于提供一种用于检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的试剂盒。
本发明的另一目的在于提供所述引物及试剂盒用于检测检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的相关应用。
一方面，本发明提供了一种用于检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的引物组，其包括具有SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示序列的引物。
另一方面，本发明还提供了一种用于检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的试剂盒，其包含本发明所述的引物组。
本发明提供的用于检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的引物组，是RT-LAMP专用引物，能够实现高效、快速、高特异性地检测新型冠状病毒SARS-CoV-2，且操作简单，灵敏度高，结果鉴定简便。
根据本发明的具体实施方案，本发明的用于检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的试剂盒中，还包含基础反应试剂，所述基础反应试剂包括：10×Thermopol反应缓冲液、MgSO4、betaine、dNTP，Bst DNA聚合酶，WarmStart RTx反转录酶。
根据本发明的具体实施方案，本发明的用于检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的试剂盒中，还包含阳性对照和/或阴性对照；优选地，所述阳性对照包含新型冠状病毒SARS-CoV-2基因组RNA，所述阴性对照为不含新型冠状病毒SARS-CoV-2基因组RNA的反应体系。
另一方面，本发明还提供了所述的引物组或所述的试剂盒在检测样品中是否存在新型冠状病毒SARS-CoV-2的应用。
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- 本发明涉及一种高危型人乳头瘤病毒分型检测的引物探针组及其应用、试剂盒及检测方法。本发明提供的试剂盒中包含特异性引物探针组，并对反应体系进行合理优化，保证了对高危型人乳头瘤病毒分型检测的灵敏度和特异性，使其更加贴合对受试者尿液样本的检测。试剂盒中包含的标准品可以辅助完成对人乳头瘤病毒高危型别进行分型定量检测，搭配不受采样手法的不同而影响质量的尿液样本，能保证细胞量维持在一个相对均衡的水平，使定量检测的结果更有意义。同时，本发明提供的检测方法能够对受检者体内HPV病毒进行定量检测，从而观察受检者体内在一定时间段内病毒型别与载量的变化情况，从而给予临床医生更多帮助，有利于医生出具针对性的治疗方案。
- 一种RT-qPCR检测黄瓜花叶病毒的方法-202311143956.2
- 刘艳梅 - 南昌师范学院
- 2023-09-06 - 2023-10-24 - C12Q1/70
- 本发明公开了一种RT‑qPCR检测黄瓜花叶病毒的方法，涉及生物技术领域。该方法包括以下步骤：(1)提取得到待检样品的总RNA，之后反转录得到cDNA；(2)以所述cDNA为模板，利用特异性引物对进行RT‑qPCR反应，根据Ct值判断所述待检样品中是否含有黄瓜花叶病毒：当15Ct值35时，为阳性，即为含有所述黄瓜花叶病毒；当Ct值≥35时，为阴性，即为不含有所述黄瓜花叶病毒。本发明针对黄瓜花叶病毒基因组编码外壳蛋白的基因保守区域，设计了特异性强的RT‑qPCR检测引物，并建立了一种高效的RT‑qPCR检测方法，可为黄瓜花叶病毒的准确高效监测防控提供了技术支持。
- 适用于15种植物检疫病毒的靶向测序建库及检测方法-202210150996.9
- 毛凌峰;孙凯;尹传林;俞晓平 - 杭州柏熠科技有限公司
- 2022-02-18 - 2023-10-24 - C12Q1/70
- 本发明提供一种适用于15种植物检疫病毒的靶向测序建库及检测方法，设计针对15种植物检疫病毒的特异引物池，并将特异性多重反转录技术与纳米孔技术相结合，建立针对15种植物检疫病毒的靶向捕获测序方法，具备高灵敏度、高通量、低成本的优点，可实现单次建库测序检测15种植物检疫病毒的目标，可解决目前植物病毒检疫存在的检测通量低、检测目标单一的问题。
- 检测BK病毒的方法和组合物-201910529553.9
- F·陈;L·I·孔;J·陈;M·捷纳提保 - 焦点诊断公司
- 2006-07-25 - 2023-10-24 - C12Q1/70
- 本发明提供了用于快速、灵敏和高度特异性地基于核酸(例如，基于DNA)检测样品中的BK病毒的方法和组合物。一般地，所述方法涉及检测具有BK病毒基因组保守区域的靶序列的靶核酸。本发明也表征了用于本发明方法的组合物和试剂盒，所述组合物包括引物、探针。
- 猫杯状病毒灭活抗原的毒价检测方法及应用-202310790990.2
- 朱旭;郝鹏;张燕红;王艳杰;张海宝;韩冬;李晓燕;孟书丽;赵嘉楠;赵飞飞;高晓宇;吴孟楠;李培艳;燕成义;杨晶;乌恩宝音;海丽丽;段可欣 - 金宇保灵生物药品有限公司;金宇共立动物保健有限公司
- 2023-06-29 - 2023-10-20 - C12Q1/70
- 本发明涉及微生物检测技术领域，尤其涉及一种猫杯状病毒灭活抗原的毒价检测方法及应用。所述猫杯状病毒灭活抗原的毒价检测方法包括如下步骤：使用灭活剂处理猫杯状病毒液，得到灭活抗原液；使用透析袋去除所述灭活抗原液中的灭活剂，得到纯化灭活抗原；所述透析袋的规格为80‑200kd；所述透析袋的透析时间为5‑12h；测定所述纯化灭活抗原的毒价。所述方法通过透析袋透析灭活剂处理后的灭活抗原，能精准的控制灭活剂的处理时间，进而缩短灭活周期。且使用透析袋可以去除灭活剂残留，在进行灭活检验时，不会因为灭活剂残留而影响灭活结果的判定。本发明所述方法无需多次抗原传代，即可获得抗原的灭活检验结果。
- 引物组和探针、试剂盒、检测猪流行性腹泻病毒野毒株和疫苗株的方法-202311144718.3
- 刘志成;勾红潮;沈海燕;张春红;乌日尼乐;聂晶晶;瞿云芝;张建峰 - 广东省农业科学院动物卫生研究所
- 2023-09-06 - 2023-10-20 - C12Q1/70
- 本发明属于生物技术领域，公开了一种引物组和探针，包含核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1‑6所示的FIP、BIP、F3、B3、LoopF和LoopB组成的引物组以及如SEQ ID NO：7‑8所示的荧光探针probe和淬灭探针Quencher，该引物组能够对猪流行性腹泻病毒野毒株、疫苗株均进行扩增，对于野毒株的ORF3基因保守区域开发出荧光引物，用于进行荧光的特征性反应，实现了对猪流行性腹泻病毒野毒株和疫苗株的高特异性、敏感性的快速定量检测。同时，本发明还提供了一种试剂盒、检测猪流行性腹泻病毒野毒株和疫苗株的方法。
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