[发明专利]一种鸡蛋腥味基因检测方法

说明书

本发明涉及基因检测技术领域，尤其指一种鸡蛋腥味基因检测方法，以待测鸡的FMO3基因的第一等位基因和第二等位基因作为为模板，用第一正向荧光标记引物、第二正向荧光标记引物和通用反向引物进行PCR扩增，采用荧光检测仪器对扩增产物进行荧光检测，根据扩增产物的荧光类型对待测鸡的FMO3基因进行SNP分型。本发明针对鸡的鸡蛋腥味基因和无鸡蛋腥味基因的核苷酸序列差异特点设计的两个正向引物和一个反向引物，实现鸡蛋腥味基因检测，提高了检测结果的准确度；本发明采用荧光探针技术，分别在两个正向引物的一端连接FAM荧光标记物和HEX荧光标记物，通过检测对PCR扩增产物的荧光类型检测，实现待测鸡的快速SNP分型，检测操作更快加简单。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，尤其指一种鸡蛋腥味基因检测方法。

背景技术

鸡蛋的鱼腥味主要来源于其中残留的三甲胺(trimethylamine，TMA)，当母鸡代谢TMA的能力不能满足机体的需要时，无法代谢转化的TMA就会逐渐累积并沉积于发育成蛋黄的卵泡中，导致一种类似鱼腥味的气味从鸡蛋中散发出来，形成鱼腥味鸡蛋。鱼腥味严重影响鸡蛋的品质和人们的感官接受能力，因此研究鸡蛋鱼腥味的产生机理并通过育种手段剔除它，具有非常重大的经济意义和社会意义。

Dolphin等于1997年首次证实了FMO3和鸡蛋鱼腥味相关联。Honkatukia等研究发现，当FMO3外显子7处即第984bp处碱基A突变为T时，引起其编码的第329个氨基酸由苏氨酸(T)转变为丝氨酸(S)，由5个氨基酸残基组成的高度保守序列FATGY变为FASGY，导致FMO3不能正常的将TMA氧化为TMAO。相关研究表明，FATGY序列可能为FMO3的底物结合区，A/T突变导致FMO3与TMA无法有效地结合，酶与底物的亲和力降低，反应速度随之变慢。我国除了白莱航蛋鸡和东乡绿壳蛋鸡不具有这种基因突变外，其他大部分鸡种群体都带有这种突变基因，定性分析表明鱼腥味表现型属于隐性遗传。鱼腥味鸡蛋常见于褐壳蛋鸡品系中，因褐壳蛋鸡基本是由洛岛红与白洛克交配而成，而洛岛红与白洛克都带有这种突变基因，导致5％～10％的商品蛋鸡会产生鱼腥味鸡蛋。Ward研究报道，褐壳蛋鸡FMO3基因突变的频率大约为20％。可见，FMO3基因突变存在着个体和品系的差异。

目前鉴定技术主要是基于变异位点产生的酶切位点通过PCR-RFLP方法进行鉴定和检测，但该方法需要进行复杂的酶切和电泳检测，费时费力。

发明内容

针对上述现有技术存在的技术问题，本发明提供一种检测结果准确度高、检测操作简单的鸡蛋腥味基因检测方法。

为了达成上述技术目的，本发明采用如下技术方案：

一种鸡蛋腥味基因检测方法，以待测鸡的FMO3基因的第一等位基因和第二等位基因作为为模板，用第一正向荧光标记引物、第二正向荧光标记引物和通用反向引物进行PCR扩增，采用荧光检测仪器对扩增产物进行荧光检测，根据扩增产物的荧光类型对待测鸡的FMO3基因进行SNP分型。

进一步的，所述第一正向荧光标记引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述第一正向荧光标记引物序列包括特异荧光序列FAM，所述特异荧光序列FAM结合FAM荧光标记物，所述特异荧光序列FAM的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

进一步的，所述第二正向荧光标记引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述第二正向荧光标记引物序列包括特异荧光序列HEX，所述特异荧光序列HEX结合HEX荧光标记物，所述特异荧光序列HEX的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。进一步的，所述通用反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

进一步的，所述第一正向荧光标记引物与第一等位基因特异匹配，所述第一等位基因为鸡蛋腥味基因。

进一步的，所述第二正向荧光标记引物与第二等位基因特异匹配，所述第二等位基因为无鸡蛋腥味基因。

进一步的，所述荧光检测仪器为酶标仪。