[发明专利]基于membrane block的JUNO蛋白在快速无创检测体外受精的应用

说明书

本发明提供一种基于membrane block的JUNO蛋白在快速无创检测体外受精的应用，通过检测受精液滴中卵母细胞受精时发生membrane block释放的JUNO蛋白，快速早期判断受精是否成功。本发明基于受精过程中卵母细胞的membrnae block机制所释放的JUNO蛋白的特异性进行检测，该蛋白只有在卵母细胞受精成功之后，从卵母细胞中释放出来阻止多精受精，通过检测JUNO蛋白以判断卵母细胞是否受精成功。相较与传统的科研人员通过拆蛋方法，此方法更加客观，检测时间比较早，如果未受精成功，此时卵母细胞还未出现老化，进而快速确定是否需要ICSI进行补救，检测方式无创，适用于大规模的推广应用。

技术领域

本发明属于生殖技术领域，具体涉及一种基于membrane block的JUNO蛋白在快速无创检测体外受精的应用。

背景技术

在辅助生殖领域，体外受精技术为广大不孕不育患者带来了福音。虽然体外受精率在60％-80％之间，但还是有部分病例出现受精完全失败或受精率低下的现象。目前由于检测手段的有限，很难准确及时地检测出卵母细胞受精是否成功，造成资源浪费，在给患者心理带来了很大的压力与痛苦，同时也对患者造成了巨大的人力和财力的浪费。因此如何及时准确地检测体外受精成功已成为生殖领域的研究及探究热点。

目前临床上根据精子和卵母细胞的孵育时间不同，可分为常规体外受精和短时体外受精。长时受精是将精子和卵母细胞放一起过夜后(17-19小时)观察是否有雌雄原核来判断是否受精成功。短时受精指精子和卵母细胞混合后4至6小时后观察第二极体来判断是否受精。若不成功，则需要进行ICSI进行补救。短时受精时，般会采用拆蛋针去除一部分卵细胞周围的颗粒细胞，如有较大比例(30％以上)卵子透明带和卵细胞之间能看到两个极体的话判定为受精成功。但临床上的观察发现，由于卵母细胞极体排出后容易碎裂导致观察不到，或者第一极体分裂为两个第二极体，或者碎裂为两部分容易引发误判。在长时受精方法中，如受精失败将无法补救，因为17-19小时后卵子早已老化ICSI补救效果很差。在体外受精过程中，是否受精成功是最初也是最为关键的一步，如果可以快速准确的评估受精结局，就能在最佳的时间给予患者补救的措施，从而减少患者的精神及经济压力。因此亟需一种客观准确快速早期的检测受精是否成功的方法。

在受精过程中，卵母细胞质膜上的JUNO蛋白(又名Folr4)与精子Izomol蛋白相互识别，介导精子与卵母细胞的融合等后续反应。卵母细胞在受精之后，会迅速发生membraneblock(质膜阻滞)，将JUNO蛋白释放，从而确保卵母细胞的单精受精，确保受精成功。本发明即基于membrane block的JUNO蛋白，在受精检测领域的应用。

发明内容

本发明目的在于提供一种基于membrane block的JUNO蛋白在快速无创检测体外受精的应用，通过检测受精过程中卵母细胞基于membrane block机制释放到受精液滴中的JUNO蛋白，能够在受精最初4-6小时客观准确判定卵母细胞是否成功受精，有助于提高临床早期判断受精结局，对下一步诊治提供指导，适用于大规模的推广应用。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种基于membrane block的JUNO蛋白在快速无创检测体外受精的应用，通过检测受精之后受精液滴中卵母细胞释放的JUNO蛋白的阳性或阴性，快速早期判断受精是否成功。

所述受精液滴中的JUNO蛋白为阳性，则受精成功；所述受精液滴中的JUNO蛋白为阴性，则受精不成功。

进一步地，在受精之后4-6小时，检测受精液滴中卵母细胞释放的JUNO蛋白的阳性或阴性。

进一步地，通过抗原抗体的特异性免疫反应，检测所述受精液滴中卵母细胞释放的JUNO蛋白的阳性或阴性。

进一步地，采用ELISA法、免疫荧光法、免疫印迹法、免疫胶体金法中的的任意一种检测方法，检测所述受精液滴中卵母细胞释放的JUNO蛋白的阳性或阴性。