[发明专利]一种基于Cas14a酶的RNA检测方法

说明书

本发明是一种RNA激活Cas14a附带切割效应的方法，具体涉及分析化学、疾病快速诊断领域。利用RNA激活Cas14a的附带切割效应，切割ssDNA荧光探针，实现对RNA检测。本发明解决了Cas系统检测RNA时切割探针为RNA的问题，丰富了Cas14a的应用与检测领领域的范围。

技术领域

本发明涉及一种基于Cas14a酶的RNA检测方法，其特征在于：可用于生物分析领域。

背景技术

CRISPR（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats）被称为规律成簇间隔短回文重复，是细菌用以保护自身对抗病毒的一个系统[1]。目前发现的CRISPR相关联CRISPR-Cas系统效应蛋白分为两大类[2]。其中Cas9与tracrRNA、引导crRNA组成效应复合物切割靶DNA[3]；Cas12a不需要tracr RNA，其单独使用crRNA作为指导，向目标双链DNA中引入交错切割，一旦切割靶标，Cas12a的附带切割活性即可被激活，可以切割TTATT序列的DNA单链[4]；Cas13a是RNA引导的RNA酶，一旦RNA靶标与sgRNA相结合，Cas13a的“附带切割”活性即可被激活成为非特异性的RNase[5]。基于这种激活附带切割的性能，CRISPR-Cas系统被广泛应用于DNA、RNA和病原微生物的检测。CRISPR-Cas14酶是近期发现的一种新的CRISPR-Cas家族的蛋白,其分子量较小，具有靶向切割DNA的活性，本发明能够相应的提供一种RNA激活Cas14a“附带切割”活性实现对RNA的检测，对生物分析领域具有重要意义；

[1] Jackson, S. A.; McKenzie, R. E.; Fagerlund, R. D.; Kieper, S. N.;Fineran, P. C.; Brouns, S. J., CRISPR-Cas: Adapting to change. Science 2017,356 (6333).

[2] Shmakov, S.; Smargon, A.; Scott, D.; Cox, D.; Pyzocha, N.; Yan,W.; Abudayyeh, O. O.; Gootenberg, J. S.; Makarova, K. S.; Wolf, Y. I.;Severinov, K.; Zhang, F.; Koonin, E. V., Diversity and evolution of class 2CRISPR-Cas systems. Nat Rev Microbiol 2017, 15 (3), 169-182.

[3] Chen, J. S.; Doudna, J. A., The chemistry of Cas9 and its CRISPRcolleagues. Nature Reviews Chemistry 2017, 1 (10).

[4] Max A. English; Luis R. Soenksen; Raphael V. Gayet; Helena dePuig; Nicolaas M. Angenent-Mari; Angelo S. Mao2; Peter Q. Nguyen; Collins, J.J., Programmable CRISPR-responsive smart materials. Science 2019.

[5] Abudayyeh, O. O.; Gootenberg, J. S.; Essletzbichler, P.; Han, S.;Joung, J.; Belanto, J. J.; Verdine, V.; Cox, D. B. T.; Kellner, M. J.; Regev,A.; Lander, E. S.; Voytas, D. F.; Ting, A. Y.; Zhang, F., RNA targeting withCRISPR–Cas13. Nature 2017, 550 (7675), 280-284。

发明内容