[发明专利]一种快速鉴定水稻双向启动子的方法

权利要求书

1.一种快速鉴定水稻双向启动子的方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)选取已通过水稻稳定转化验证的两个双向启动子，OsBDP1和OsBDP2；

(2)构建双报告载体GFP-RFP reporter(SEQ ID NO.1)；

(3)将OsBDP1和OsBDP2扩增后分别插入双报告载体GFP-RFP reporter(SEQ ID NO.1)，构建OsBDP1 reporter和OsBDP2 reporter载体(SEQ ID NO.2，SEQ ID NO.3)；

(4)水稻原生质体的制备与转化；

(5)转化后对OsBDP1、OsBDP2的活性进行验证。

2.根据权利要求1所述的快速鉴定水稻双向启动子的方法，其特征在于：所述步骤(2)中双报告载体GFP-RFP reporter构建方法为：以pCambia1301载体为模板，扩增Ubiquitin启动子；以载体pGWB454为模板，扩增RFP编码序列；使用限制性内切酶NcoI和EcoRI将p1300LV载体线性化，用无缝连接试剂盒将上述3个片段快速连接，转化至大肠杆菌DH5α中，筛选阳性转化子。

3.根据权利要求1所述的快速鉴定水稻双向启动子的方法，其特征在于：构建负对照载体。

4.根据权利要求3所述的快速鉴定水稻双向启动子的方法，其特征在于：所述负对照载体构建方法为：使用限制性内切酶KpnI和BamHI将GFP-RFPreporter载体线性化，将2个mini35s或一段无功能序列插入线性化载体，连接后转化至大肠杆菌DH5α中，筛选阳性转化子，得到2个负对照载体mini35s reporter(SEQ ID NO.4)、promoterless reporter(SEQID NO.5)。

5.根据权利要求1所述的快速鉴定水稻双向启动子的方法，其特征在于：所述步骤(3)扩增的引物序列分别为：SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9)。