[发明专利]一种海洋真菌来源azaphilones二聚体类化合物及其在抗肿瘤剂中的应用

说明书

本发明提供了一种海洋真菌来源azaphilones二聚体类化合物及其在抗肿瘤剂中的应用，所述化合物的结构式如式1或式2所示。通过发酵培养格孢菌（Pleosporalessp.）HBU‑135菌株，并从发酵产物中分离得到上述化合物。经验证，本发明azaphilones二聚体类式1和式2化合物对人乳腺癌细胞（MDA‑MB‑231和MCF‑7）、胃癌细胞（MGC‑803）、宫颈癌细胞（HeLa）和肺上皮癌细胞（A‑549）具有强的抑制活性，可用作抗肿瘤药物，应用前景广阔。

技术领域

本发明涉及海洋天然药物化学领域，具体地说涉及一种海洋真菌来源azaphilones二聚体类化合物及其在抗肿瘤剂中的应用。

背景技术

海洋约占地球总表面积的71％，蕴含了丰富多样的生物资源，是人类进行药物研发的宝贵资源库。自20世纪40年代以来，以头孢菌素、阿糖胞苷和ET-743为代表的多种海洋来源药物被成功运用到临床上。几乎所有的海洋生物都能产生具有生物活性的次级代谢产物。其中，海洋来源真菌微生物资源因为其代谢产物丰富和可重复发酵等优点成为海洋药物最重要的来源之一。以海洋真菌来源的azaphilones类化合物为代表的抗肿瘤活性化合物已经成为现代海洋药物研究的一大亮点。但到目前为止，国内外均未见对海洋真菌来源含[2+2]二聚化的azaphilones类化合物及其抗肿瘤活性报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种海洋真菌来源azaphilones二聚体类化合物及其制备方法，以解决现有技术中海洋真菌来源azaphilones类化合物的种类及抗肿瘤活性有限的问题。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一种海洋真菌，所述海洋真菌为格孢菌(Pleosporales sp.)HBU-135菌株，保藏日期为2018年10月18日，保藏编号为CGMCCNo.16379，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

1.样品来源

海洋真菌HBU-135菌株分离自海洋沉淀物，所述海洋沉淀物样品于2015年6月采自河北省沧州市黄骅港海域。海底沉淀物样品采集后，立刻放于–20℃冰箱中保存，并送往实验室进行后续真菌的分离工作。

2.真菌的分离

2.1培养基的选择

(1)PDA培养基

马铃薯(去皮)200g，葡萄糖20g，海盐30g，琼脂20g，水1000mL。分离真菌时加25μg/mL硫酸链霉素，25μg/mL氨苄青霉素，抑制细菌生长。

(2)无盐PDA培养基

马铃薯(去皮)200g，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000mL。分离真菌时加25μg/mL硫酸链霉素，25μg/mL氨苄青霉素，抑制细菌生长(无盐PDA与加盐PDA对比)。

(3)孟加拉红培养基

马铃薯(去皮)200g，葡萄糖20g，海盐30g，孟加拉红(rose Bengal)33mg(抑制生长快的霉菌蔓延生长)，琼脂20g，水1000mL。

2.2真菌的分离、纯化

将上述海洋沉淀物样品置于无菌玻璃器中，加入1mL无菌水调至黏稠状。取出0.1mL上述液体用无菌水分别稀释10倍、100倍、1000倍，得到4个浓度梯度的匀浆液，用无菌移液管分别取0.2mL各浓度匀浆液分别加入PDA、无盐PDA、孟加拉红培养基中，用涂布器涂匀。每个浓度梯度分别做三个平行。用封口膜封好，并写上编号。以上分离实验均在无菌条件下进行。