[发明专利]活性肽及其制备方法

权利要求书

1.一种活性肽，其特征在于，其氨基酸序列选自SEQ ID NO.1-5中的任意一种。

2.权利要求1所述的活性肽在制备抗菌制剂中的应用；

优选地，所述活性肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；

优选地，所述菌为革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌或真菌；

优选地，所述菌为大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌或白色念珠菌；

优选地，所述抗菌制剂为喷雾剂、溶液剂、凝胶剂、乳液剂、软膏剂、含漱剂、贴剂、吸入剂、滴眼剂、滴鼻剂、膜剂或泡沫剂。

3.一种抗菌制剂，其特征在于，其含有权利要求1所述的活性肽。

4.一种分离的核酸分子，其特征在于，其编码如权利要求1所述的活性肽；优选地，核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。

5.一种载体，其特征在于，其含有权利要求4所述的核酸分子；优选地，所述载体含有多个所述核酸分子；

优选地，所述核酸分子的数量为1-10个，优选为3个；

优选地，多个所述核酸分子以同向串联的方式存在于所述载体上；

优选地，相邻两个核酸分子插入有切割序列，所述切割序列所编码的多肽序列可被蛋白酶特异性识别并切割；

优选地，所述蛋白酶选自肠激酶和羧肽酶B中的至少一种；

优选地，所述多肽序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示；

优选地，所述切割序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所；

优选地，所述载体含有驱动所述核酸分子表达的启动子；

优选地，所述启动子为T7启动子；

优选地，所述载体的骨架为pET-28a；

优选地，多个所述核酸分子位于所述载体的NcoI酶切位点和XhoI酶切位点之间。

6.一种重组细胞，其特征在于，其含有权利要求5所述的载体。

7.根据权利要求6所述的重组细胞，其特征在于，所述重组细胞为大肠杆菌。

8.一种制备如权利要求1所述的活性肽的方法，其特征在于，其包括：培养权利要求6或7所述的重组细胞。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法包括：在培养所述重组细胞的培养液的OD600达到30-50时，加入诱导剂进行诱导培养；

优选地，诱导培养的温度为28-33℃，pH为6.8-7.2，诱导培养的时间5-15h；

优选地，诱导剂选自IPTG或者乳糖；

优选地，诱导剂在培养液中的浓度控制为0.1-1mg/L。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，当重组细胞为大肠杆菌时，所述方法包括：在培养结束后，收集菌体对其进行细胞壁破碎，收集破壁液；

优选地，所述方法还包括：对所述破壁液进行超滤，收集澄清液；

优选地，采用分子截留量为750KD的中空纤维膜对所述破壁液进行超滤；

优选地，所述方法还包括：使用肠激酶和羧肽酶B对澄清液中进行酶切，得到酶切溶液；

优选地，所述方法还包括：将所述酶切溶液进行超滤后再进行阳离子层析，用洗脱溶液洗脱后，收集洗脱液；

优选地，阳离子层析所用的层析介质为SP-Sepharose Fast Flow介质；

优选地，所述洗脱溶液是含1.5-2M NaCl的Tris-HCl溶液；

优选地，所述方法还包括：对所述洗脱液进行阴离子层析，收集流穿液；

优选地，阴离子层析所用的层析介质为Q-Sepharose Fast Flow介质；

优选地，所述方法还包括：采用分子截留量为1KD的切向流膜对所述流穿液进行超滤浓缩，得到所述活性肽。