[发明专利]一种人脐带间充质干细胞培养基及人脐带间充质干细胞的培养方法

说明书

本发明公开了一种人脐带间充质干细胞培养基，包括基础培养基，添加在所述基础培养基中的复合添加剂，所述复合添加剂的成分以终浓度计包括：丝素蛋白6.5‑9.3μg/L、羧甲基纤维素钠5.4‑7.2μg/L、大豆低聚肽10.0‑14.0μg/L、3‑吡啶甲酸10.5‑14.8μg/L、辅酶Q₁₀ 8.0‑12.0μg/L、肌醇15.0‑20.0μg/L、蔗糖脂肪酸酯6.8‑7.2ng/L、α‑酮戊二酸8.2‑9.5μg/L、微量元素22.0‑26.0μg/L。本发明采用羧甲基纤维素钠和丝素蛋白配合，提高细胞的粘附性，有利于细胞固着，促进细胞的生长，还添加有大豆低聚肽、3‑吡啶甲酸、辅酶Q₁₀、α‑酮戊二酸复配使用，提高细胞生长速度和增殖数量，提高细胞分泌生长因子的性能。添加微量元素镁、铁、锌、硒，为细胞的生长提供更好的营养环境，进一步促进细胞的增殖。

技术领域

本发明涉及干细胞技术领域，尤其涉及一种人脐带间充质干细胞培养基及人脐带间充质干细胞的培养方法。

背景技术

间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells，MSCs)是一种多能干细胞，它具有干细胞的所有共性，即自我复制能力和多向分化能力，并且来源广泛，例如可来源于骨髓、脐带血、脐带组织、胎盘组织和脂肪组织等。间充质干细胞属于多能干细胞，在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为胰岛、神经、血管内皮、骨、软骨、肌肉、肝脏、心肌等多种组织细胞。MSCs因其相对缺少免疫源性，培养技术简单，并可冷冻保存，因此已成为细胞及基因治疗研究的种子细胞，具有潜在的临床应用价值，已成为干细胞研究的热点。

人脐带间充质干细胞(Human Umbilical Cord mesenchymal stem cells，HUC-MSCs)表达多种干细胞的特有标志，具有分化潜力大，增殖能力强，免疫原性低，取材方便，无道德伦理问题限制，易于工业化制备等特征。人脐带间充质干细胞培养上清液含有大量的细胞生长因子等营养物质，该营养物质能够有效的促进皮肤细胞的新陈代谢；促进细胞外透明质酸、糖蛋白等大分子的合成和分泌，增强皮肤的亲水性；促进表皮细胞的生长、分化和修复，使衰老死亡的细胞得以及时补充；同时能够加速角质层修复，加速基底新老细胞更替，使肌肤回到年轻姿态。

目前对HUC-MSCs常规体外培养中所用培养基培养效果不理想，存在细胞增殖速度慢，表达低、获得增殖的细胞数量有限和分泌的生长因子的数量和质量较少等技术缺陷，因此，寻找一种可以促进人脐带间充质干细胞生长的培养基是本领域技术人员亟待解决的技术问题。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种人脐带间充质干细胞培养基，可以促进细胞快速、稳定增殖，提高细胞的活性。

本发明的目的之二在于提供一种人脐带间充质干细胞的培养方法。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现：

一种人脐带间充质干细胞培养基，包括基础培养基，添加在所述基础培养基中的复合添加剂，所述复合添加剂的成分以终浓度计包括：丝素蛋白6.5-9.3μg/L、羧甲基纤维素钠5.4-7.2μg/L、大豆低聚肽10.0-14.0μg/L、3-吡啶甲酸10.5-14.8μg/L、辅酶Q₁₀ 8.0-12.0μg/L、肌醇15.0-20.0μg/L、蔗糖脂肪酸酯6.8-7.2ng/L、α-酮戊二酸8.2-9.5μg/L、微量元素22.0-26.0μg/L。

进一步地，所述复合添加剂的成分以终浓度计包括：丝素蛋白8.5μg/L、羧甲基纤维素钠6.0μg/L、大豆低聚肽12.0μg/L、3-吡啶甲酸13.5μg/L、辅酶Q1010.0μg/L、肌醇18.0μg/L、蔗糖脂肪酸酯6.5ng/L、α-酮戊二酸8.7μg/L、微量元素24.0μg/L。

进一步地，所述丝素蛋白的分子量为1474-1531Da，所述大豆低聚肽的平均分子量小于500Da。