[发明专利]通过外源添加能显著促进小鼠C2C12成肌细胞分化的促分化试剂YYQ1

说明书

通过外源添加能显著促进小鼠C2C12成肌细胞分化的促分化试剂YYQ1，属于细胞生物学技术领域，其特征在于：所述的促分化试剂YYQ1的成分为10μM的视黄醇，通过将促分化试剂YYQ1添加于体外培养的C2C12细胞，能够获得较好的分化效率，促进C2C12细胞分化，最终达到外源添加后能显著促进小鼠C2C12成肌细胞的分化的目的，促分化试剂YYQ1为促进动物肌肉分化提供依据，以视黄醇促进肌肉分化，具有较大的实际应用价值。本发明制作简单，可操作性强，成本低廉，效果明显。

技术领域

本发明涉及一种通过外源添加能显著促进小鼠C2C12成肌细胞分化的促分化试剂YYQ1，属于细胞生物学技术领域。

背景技术

视黄醇(Retinol，简称ROL)，又称维生素A，是脂溶性的醇类物质，视黄醇对于维持正常视觉功能、维持骨骼正常生长发育、促进细胞增殖与生长发挥重要作用。维生素A有多种分子形式，是一个具有脂环的不饱和一元醇，包括动物性食物来源的维生素A1和维生素A2 两种，维生素A1多存在于哺乳动物及咸水鱼的肝脏中，而维生素A2常存在于淡水鱼的肝脏中，由于维生素A2的活性比较低，所以通常所说的维生素A是指维生素A1。本申请中所用的维生素A也是维生素A1。之前对视黄醇的研究，主要集中在饮食缺乏视黄醇方面，当视黄醇缺乏时，可影响骨骼的生长、导致睾丸间质细胞分化受损从而导致生殖功能衰退、皮肤干燥粗糙，尤其对眼睛的影响较大，如干燥性眼炎、角膜软化以及夜盲症等。细胞分化是指同一来源的细胞逐渐产生出形态结构、功能特征各不相同的细胞类群的过程，其结果是在空间上细胞产生差异，在时间上同一细胞与其从前的状态有所不同。细胞分化的本质是基因组在时间和空间上的选择性表达，通过不同基因表达的开启或关闭，最终产生标志性蛋白质。一般情况下，细胞分化过程是不可逆的，然而在某些条件下，分化了的细胞也不稳定，其基因表达模式也可以发生可逆性变化，又回到其未分化状态，这一过程称为去分化。目前还没有视黄醇影响体外培养的成肌细胞分化的研究。成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分，细胞扁平，多突起，呈星状，胞质较丰富，呈弱碱性，胞核较大，扁卵圆形，染色质疏松，着色浅，核仁明显，在电镜下，胞质内富有粗面内质网、游离核糖体和发达的高尔基复合体，表明细胞合成蛋白质功能旺盛。成纤维细胞既合成和分泌胶原蛋白和弹性蛋白，生成胶原纤维、网状纤维和弹性纤维，也合成和分泌糖胺多糖和糖蛋白等基质成分。成纤维细胞处于功能静止状态时，称为纤维细胞，细胞变小，呈长梭形，胞核小，着色深，胞质内粗面内质网少、高尔基复合体不发达，嗜酸性。在一定条件下，如创伤修复、结缔组织再生时，纤维细胞又能再转变为成纤维细胞，同时，成纤维细胞也能分裂增生。成纤维细胞常通过基质糖蛋白的介导附着在胶原纤维上，在趋化因子比如淋巴因子、补体等的吸引下，成纤维细胞能缓慢地向一定方向移动。2018年，巴塞罗那生物医学研究院等机构的科学家们通过研究解释了皮肤成纤维细胞是如何衰老的，并将其结果刊登在国际杂志Cell上(Marion ClaudiaSalzer, Atefeh Lafzi,Antoni Berenguer Llergo,et al.Identity Noise andAdipogenic Traits Characterize Dermal Fibroblast Aging.Cell,2018；DOI:10.1016/j.cell.2018.10.012)：皮肤成纤维细胞对于胶原蛋白和其他组成真皮的蛋白的产生非常关键，同时其对于保护皮肤的屏障的功能以及修复皮肤损伤也很重要。随着年龄的增长，这些皮肤成纤维细胞会使其细胞身份好像忘记它们是什么一样，因此细胞的活性会发生改变，真皮就会失去产生胶原蛋白的能力，而且其修复伤口的能力也会明显被损伤。老年人常常会面对这些问题，因为其机体皮肤并不能正常愈合，而且屏障功能也会下降，这就增加皮肤感染和机体系统性感染的风险，从而影响机体组织的健康。小鼠成纤维细胞系C2C12由Yaffe等克隆建立，体外培养的C2C12细胞能在低血清诱导条件下分化为多核的肌管，并表达myosin和myogenin等成熟骨骼肌的各种标志蛋白，因此，C2C12细胞通常成为体外研究成纤维肌肉细胞增殖和分化的首选模型。在实际小鼠C2C12 成肌细胞培养实验过程中，常常出现细胞状态不好，细胞只是一个劲的疯长，怎么诱导都不分化，为实验的顺利开展造成较大的影响，严重影响到实验的进程。因此如何找到一种试剂，外源添加后能显著促进小鼠C2C12成肌细胞的分化，以便更加快速地开展成纤肌肉维细胞的相关实验成为急需解决的一大难题，所以发明一种通过外源添加能显著促进小鼠C2C12成肌细胞分化的促分化试剂YYQ1是必要的。