[发明专利]新型冠状病毒IgM抗体酶联免疫检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种新型冠状病毒IgM抗体酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，包括酶结合物、样品稀释液、阴性对照液、阳性对照液、底物A液、底物B液、终止液、浓缩洗涤液和预包被新冠病毒抗原的包被板；

所述酶结合物为用酶标稀释液按工作浓度配制的羊抗人IgM-HRP工作液；

所述预包被新冠病毒抗原的包被板的制备方法为：

（1）包被：将新冠病毒抗原用包被缓冲液稀释后，按100μL/孔包被到包被板的孔内，在2～8℃吸附21～24小时；

（2）封闭：弃去包被液，用10mM的浓缩洗涤液按300μL/孔洗板，再用封闭液按150μL/孔在2～8℃封闭16～18小时；

（3）干燥及保存：弃去封闭液，经干燥处理后密封，置2～8℃保存。

2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgM抗体酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述新冠病毒抗原为基因工程重组表达的新冠病毒S2蛋白。

3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgM抗体酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述包被缓冲液为含0.02%叠氮钠的0.05MpH9.6碳酸盐缓冲液，按1:500～1:1000的比例稀释新冠病毒抗原。

4.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgM抗体酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述封闭液为含5%蔗糖、2%液体明胶、0.25%干酪素钠、0.1%ProClin300的0.07M硼酸-硼砂缓冲液。

5.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgM抗体酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述样品稀释液为含20%山羊血清、0.2%干酪素钠、5%PEG6000、4%蔗糖、0.1%ProClin300的10mMpH7.4PBS。

6.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgM抗体酶联免疫检测试剂盒，其特征在于所述：所述酶标稀释液为含5%蔗糖、2%液体明胶、0.1%氨基比林、1%甘油、20%小牛血清、0.1%ProClin300的0.07M硼酸-硼砂缓冲液。

7.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgM抗体酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述底物A液为含有0.06%pH5.2～5.3的10mM柠檬酸-乙酸钠缓冲液；

所述底物B液含有0.06%TMB盐酸盐的柠檬酸缓冲液、0.001%的硫代硫酸钠和0.02%的碳酸钠。

8.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgM抗体酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述阳性对照液为在样品稀释液中按1:30～1:100的比例加入阳性血清制成，阳性对照液的吸光度值大于1.0；

所述阴性对照血清为在样品稀释液中，按5%的比例加入阴性血清制成，阴性对照液的吸光度值小于0.1。

9.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgM抗体酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述终止液成分为1mol/L的硫酸；

所述浓缩洗涤液成分为含20%NaCl、0.5%KCl、3%Tween-20的0.25M pH6.0~6.5 PB。

10.一种新型冠状病毒IgM抗体酶联免疫检测方法，其特征在于，包括权利要求1～9任一项所述的新型冠状病毒IgM抗体酶联免疫检测试剂盒，所述检测方法包括以下步骤：

S1、样本稀释：将待测血液样本用样品稀释液按1:100稀释；

S2、抗原-抗体反应：将已稀释的待测血液样本、阴性对照液、阳性对照以100μL/孔的量分别加入到预包被新冠病毒抗原的包被板的不同孔内，37℃温育60分钟；

S3、抗原抗体复合物与酶标抗体反应：弃去反应液，将包被板用浓缩洗涤液洗涤移去未结合的成分，以100μL/孔的量加入酶结合物，37℃温育30分钟；

S4、显色：弃去反应液，将包被板用浓缩洗涤液洗涤移去未结合的成分，在包被板每孔各加入底物A液、底物B液50μL，37℃避光显色15分钟；

S5、终止反应：在包被板每孔加入50μL的终止液终止反应；

S6、吸光度测定：用酶标仪在450nm/630nm波长依序测量包被板各孔的吸光度值；

S7、结果分析与判定：通过S6吸光度测定结果验证试验有效性，若阳性对照液吸光度平均值/阴性对照液吸光度平均值≥2.1，则试验成立；通过临界值判定检测结果，临界值（cut-off）=0.15+阴性对照液吸光度平均值(当阴性对照液吸光度平均值0.05时，按0.05计算)，若待测血液样本吸光度值＞临界值，则待测血液样本为阳性结果，若待测血液样本吸光度值＜临界值，则待测血液样本为阴性结果。