[发明专利]一种耐高温粪肠球菌的筛选与驯化方法

说明书

本发明涉及一种耐高温粪肠球菌的筛选与驯化方法，包括以下步骤：1)对粪肠球菌菌苔进行预处理；2)从步骤1)中挑选优势菌落并进行多次极限温度液体培养及平板菌落筛选，即得到耐高温粪肠球菌；步骤2)中，极限温度为49‑51℃。与现有技术相比，本发明通过极限温度培养法及平板菌落筛选法筛选耐热个体，并通过极限温度重复传代培养的方法稳定其耐热遗传特性，最终使菌株驯化获得耐热性能，提高其在喷雾干燥生产工序中的存活率，降低生产成本；本发明操作程序简单，重复性好，能大幅度提高粪肠球菌喷雾干燥的成活率，推动其生产与应用。

技术领域

本发明属于益生菌发酵技术领域，涉及一种耐高温粪肠球菌的筛选与驯化方法。

背景技术

粪肠球菌为革兰氏阳性菌，属于乳酸菌，是农业部添加剂目录允许使用的安全菌种之一，在动物机体内具有保护屏障功效、营养功效、抑菌功效等作用，其在畜禽上的益生作用也广泛得到认可。

与大多数乳酸菌一样，粪肠球菌存在不耐热、难储存等问题，导致其生产加工及应用成本居高不下。目前粪肠球菌粉剂生产多以冷冻干燥为主，保证了其存活率，但是冷冻干燥技术存在设备昂贵及能耗高两大问题。有一些厂家选择微胶囊包被后低温喷雾干燥的形式生产粪肠球菌粉剂，生产成本大为降低。然而，现有微胶囊包被喷雾干燥技术主要通过包被材料的选择及包被工序的优化来提高干燥成活率，却忽略了对菌株本身耐热特性方面的改造，导致粪肠球菌干燥成活率普遍比较低。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种耐高温粪肠球菌的筛选与驯化方法，该方法步骤简单，且重复性好，通过使菌株获得耐热性能的方式提高喷雾干燥成活率，降低生产成本。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

一种耐高温粪肠球菌的筛选与驯化方法，该方法包括以下步骤：

1)对粪肠球菌菌苔进行预处理；

2)从步骤1)中挑选优势菌落并进行多次极限温度液体培养及平板菌落筛选，即得到耐高温粪肠球菌；

步骤2)中，所述的极限温度为49-51℃。

进一步地，步骤1)中，预处理过程为：

1-1)从菌种斜面上挑选菌苔并接种于液体培养基中，之后在49-51℃静置厌氧培养45-50h；

1-2)将液体培养基划线接种于固体培养基上，之后在35-40℃厌氧培养45-50h。

进一步地，步骤2)中，极限温度培养过程为：将优势菌落接种于液体培养基中，之后在49-51℃静置厌氧培养45-50h。

进一步地，步骤2)中，平板菌落筛选过程为：将液体培养基划线接种于固体培养基上，之后在35-40℃厌氧培养45-50h。

进一步地，所述的液体培养基及固体培养基均为改良MRS培养基。

进一步地，所述的液体培养基包括以下组分：蛋白胨9-11g/L、牛肉膏9-11g/L、酵母浸粉4-6g/L、乙酸钠4-6g/L、柠檬酸二胺1.5-2.5g/L、磷酸氢二钾1.5-2.5g/L、吐温800.5-1.5g/L、硫酸镁0.3-0.8g/L及硫酸锰0.2-0.3g/L。

进一步地，所述的液体培养基的pH值为7-7.5。

进一步地，所述的固体培养基包括以下组分：蛋白胨9-11g/L、牛肉膏9-11g/L、酵母浸粉4-6g/L、乙酸钠4-6g/L、柠檬酸二胺1.5-2.5g/L、磷酸氢二钾1.5-2.5g/L、吐温800.5-1.5g/L、硫酸镁0.3-0.8g/L、硫酸锰0.2-0.3g/L及琼脂15-20g/L。

进一步地，步骤2)中，进行极限温度液体培养及平板菌落筛选的次数为3-5次。