[发明专利]二角山羊草7Sb

权利要求书

1.一种二角山羊草7S^b染色体特异分子标记引物组合的应用，其特征在于，使用二角山羊草7S^b染色体特异分子标记引物组合进行PCR扩增，对小麦背景中是否含有二角山羊草7S^b染色体进行检测或辅助检测；

所述引物组合为下列六对引物组合，引物对的碱基序列如下：

TNAC1801：

F：5’-CAGCAACTCAGCTTTGGTCAC-3’，

R：5’-GCAAGCCTGTTTGGCATTT-3’；

TNAC1924：

F：5’-TAGCTTTGGAACGATGTGTGG-3’，

R：5’-TGTGGAGCAGTGCTGTTTATG-3’；

TNAC1791：

F：5’-GCTGCTGCTAAAGAGAAGGAA-3’，

R：5’-CCACGACACGTCCTGTAGC-3’；

TNAC1865：

F：5’-CTTACCATGAGCATGCAGAGC-3’，

R：5’-GATCGGCATGATAAGTTTCCA-3’；

TNAC1902：

F：5’-AATACCAGGTCCTCCAACTTT-3’，

R：5’-TGGAATCGCTGAGAAAGAATG-3’；

TNAC1937：

F：5’-AGCGGCATGTGGTAATCAATA-3’，

R：5’-CGGACGATCGAGAACACC-3’。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于 ,所述的检测或辅助检测的步骤如下：

（1）以待测的可能含有二角山羊草7S^b染色体的小麦背景系的基因组总DNA为模板，用二角山羊草7S^b染色体特异分子标记引物组合分别对其进行PCR扩增，扩增产物使用凝胶电泳进行检测；

（2）如果待测模板DNA凝胶电泳检测图谱中含有与阳性对照相同的特异DNA条带而阴性对照无该带，则说明待测小麦背景系的基因组中含有二角山羊草7S^b染色体；如果待测模板DNA凝胶电泳检测图谱中不含有与对照相同的特异多态性DNA条带，则说明待测小麦背景系的基因组中不含有二角山羊草7S^b染色体。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤（1）中所述的阳性对照为中国春-二角山羊草7S^b染色体附加系；所述的阴性对照为中国春小麦和/或其他不同小麦品种/品系。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤（1）中所述的PCR扩增特征在于30μLPCR反应体系为：25ng/μL的模板DNA 2 .0μL，5U/μL Taq DNA polymerase 0 .3μL，200μM的dNTPs，含Mg²⁺的10×PCR buffer 3 .0μL，10μM的上、下游引物各2μL，用无菌双蒸馏水补充反应体系至30μL；

所述的PCR扩增程序为：94 ℃预变性3min，随后35个循环：94℃变性45s，57℃退火45s，72℃延伸2min，最后72℃延伸10min，4℃保存。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤（1）中所述的PCR扩增程序还包括利用限制性内切酶酶切，具体为引物TNAC1791、TNAC1865、TNAC1902和TNAC1937使用限制性内切酶HaeIII或TaqI进行酶切。

6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于步骤（1）中使用2%琼脂糖凝胶电泳进行检测。