[发明专利]一种肝癌细胞转移检测用的单克隆抗体及试剂盒

说明书

本发明涉及一种肝癌细胞转移检测用的单克隆抗体及试剂盒，该抗体能够特异性的结合本发明的RRM2B蛋白，并且具有较好的结合能力以及特异性，适宜大规模推广使用。

技术领域

本发明涉及检测领域，具体的涉及一种用于肝癌细胞转移检测用的单克隆抗体及相应的试剂盒。

背景技术

核糖核苷酸还原酶（ribonueleotidereductase，RR）广泛分布于各种生物细胞中，其作用是参与核糖核苷酸还原成脱氧核糖核苷酸的过程，在核苷酸代谢过程中发挥着中心作用，是唯一使核糖核苷酸转变为脱氧核糖核苷酸的酶。而脱氧核糖核苷酸是DNA合成和修复的原材料，因此该酶是DNA通路中合成和修复的限速酶。RR全酶结构包括大亚基α和小亚基β，只有形成α2β2异四聚体结构才能具备活性。在人体中RR由3个亚基构成，包括1个大亚基[核糖核苷酸还原酶M1（ribonueleotidereductaseM1，RRM1）]和2个小亚基（RRM2和RRM2B）构成。由于RR对于DNA的合成发挥着关键的作用，因此它与恶性肿瘤生物学行为、转移潜能和肿瘤耐药的产生都有重要影响。

RRM2B 基因是位于 8q22.3 的核基因，编码 p53-诱导型核糖核苷酸还原酶（RNR）的小亚基（p53R2）。RNR 是一种还原酶，可以催化核糖核苷酸（NDP）还原生成相应脱氧核糖核苷酸（dNDP），是体内 dNTP 从头合成的限速酶和关键酶。RNR 包含酶活性中心(RRM1)和底物特异结合位点（RRM2 或 p53R2）；位于酶活性中心的自由基可以催化 NDP 还原为dNDP；dNTPs 在细胞内的平衡通过 RNR 酶的底物特异性结合位点的变构受到调控。

目前研究表明，RRM2B与多种肿瘤的发生和发展密切相关，在不同类型的肿瘤中发挥类似癌基因或抑癌基因的功能。特别是研究表明，RRM2B 在肝细胞癌中表达降低，并与患者的肝内转移呈负相关。因此通过检测RRM2B的表达量来诊断肝癌已经是可行的技术。而且已有研究表明，而 RRM2B 的表达与肝细胞癌的患者预后密切相关，RRM2B 表达水平高的患者其术后生存期比表达低的患者生存期长 ；COX 回归模型单因素和多因素分析结果显示，RRM2B 蛋白的表达水平是影响肝细胞癌预后的独立因素之一。因此，RRM2B 已经成为评估肝细胞癌预后的一项有效指标。CN201310606030.2中也公开了核糖核苷酸还原酶亚基M2B(Ribonucleoside-diphosphate reductasesubunit M2B，RRM2B)基因或其蛋白检测试剂用于制备诊断肝癌细胞转移的试剂盒。

但是由于常规的核酸检测需要复杂的仪器设备，在偏远山区或者普通社区并不适宜推广使用，而针对该基因的抗体检测技术却可以通过试纸条简单的实现检测，而且不需要任何仪器设备，方便快捷，适宜推广使用。因此，针对RRM2B的抗体研究变得尤为重要。虽然目前已有相应的抗体，但是抗体并非特异性针对相应的预后片段抗原所做的，而且抗体的结合活性也有待进一步的提高。。

发明内容

本发明提供一种RRM2B基因的编码序列如SEQ ID NO.：1所示；

一种RRM2B蛋白序列如SEQ ID NO.2所示。

在另一优选例中，所述的RRM2B蛋白用于制备检测试剂包括RRM2B的特异性抗体。

另外一方面，本发明提供一种特异性结合RRM2B蛋白的单克隆抗体。

具体的，该单克隆抗体的重链可变区氨基酸序列为SEQ.ID.NO.3:

EVQLEESGTELARPGASVKLSCKASGYIFSMAWGTWIKQRPGQGLEWIGESYPGAPDTRYTQCKAGKATLTADKSSSTAYMQLSSLASEDSAVYYCAGACFQLKSWGLGTTLAVSS.

轻链可变区序列氨基酸序列为SEQ.ID.NO.4: