[发明专利]一种促进间充质干细胞定向分化的方法

说明书

本发明涉及干细胞领域，提供一种促进间充质干细胞定向分化的方法，用于解决干细胞向骨细胞分化效率低的问题。本发明提供的一种促进间充质干细胞定向分化的方法，包括：采用DMEM培养基培养间充质干细胞，细胞复苏后于6孔板中贴壁培养，每隔2d用0.25%胰酶消化并传代；将培养得到间充质干细胞接种到分化培养基上，进行诱导分化培养；所述分化培养基包括：胰岛素3~5μg/ml，转铁蛋白0.05~0.08μg/ml，生长激素1~3ng/ml、谷胱甘肽80~100μg/ml、L‑谷氨酰胺0.5~2mM，β‑巯基乙醇20~50μM，丙酮酸钠0.5~0.7mM，非必须氨基酸0.05~0.1mM，纳米三氧化二铁8~12μM，余量为DMEM培养基。培养基中未加入生物血清，同时引入了纳米氧化物，可以显著的促进间充质干细胞向骨细胞分化。

技术领域

本发明涉及干细胞领域，具体涉及一种促进间充质干细胞定向分化的方法。

背景技术

干细胞是一类具有自我更新能力和多向分化潜能的细胞类型，它是人体新 生细胞从增殖、迁移、分化直至达到成熟这一系列过程中的第一个细胞。关于 干细胞的研究已成为目前生物学上最具挑战性、也最具有吸引力的领域之一。 干细胞按其来源可分为胚胎干细胞和成体干细胞。而间充质干细胞(MSCs， mesenehymal stem cells)就是成体干细胞的其中一种。作为一类具有自我更新 能力的成体干细胞，间充质干细胞可以向多种细胞组织类型分化。它不仅可以 向多种间质来源的细胞谱系分化，例如脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、肌键 细胞等等，也可以向其他的细胞谱系分化，比如星形胶质细胞、肌原细胞、心 肌细胞以及神经细胞等。由于体外分离培养的MSCs在细胞表型上没有明显的 改变，也无功能缺失，因此被认为其对于细胞疗法和组织修复工程具有重要的 意义。

如何促进间充质干细胞定向分化是一个亟待解决的问题。

发明内容

本发明解决的技术问题为解决干细胞向骨细胞分化效率低的问题，提供一种促进间充质干细胞定向分化的方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：

一种促进间充质干细胞定向分化的方法，包括：采用DMEM培养基培养间充质干细胞，细胞复苏后于6孔板中贴壁培养，每隔2d用0.25%胰酶消化并传代；将培养得到间充质干细胞接种到分化培养基上，进行诱导分化培养；所述分化培养基包括：胰岛素3~5μg/ml，转铁蛋白0.05~0.08μg/ml，生长激素1~3ng/ml、谷胱甘肽80~100μg/ml、L-谷氨酰胺 0.5~2mM，β-巯基乙醇20~50μM，丙酮酸钠0.5~0.7mM，非必须氨基酸0.05~0.1mM，纳米三氧化二铁8~12μM，余量为DMEM培养基。

将纳米三氧化二铁引入干细胞的培养基中，可以在一定程度上促进干细胞向骨细胞分化。

培养基中未加入生物血清，同时引入了纳米氧化物，可以显著的促进间充质干细胞向骨细胞分化。

优选地，包括胰岛素4~5μg/ml，转铁蛋白0.06~0.08μg/ml，生长激素2~3ng/ml、谷胱甘肽90~100μg/ml、L-谷氨酰胺 1.5~2mM，β-巯基乙醇25~50μM，丙酮酸钠0.6~0.7mM，非必须氨基酸0.08~0.1mM，纳米三氧化二铁10~12μM，余量为DMEM培养基。

优选地，包括胰岛素4μg/ml，转铁蛋白0.06μg/ml，生长激素2ng/ml、谷胱甘肽90μg/ml、L-谷氨酰胺 1.5mM，β-巯基乙醇25μM，丙酮酸钠0.6mM，非必须氨基酸0.08mM，纳米三氧化二铁10μM，余量为DMEM培养基。

优选地，所述纳米三氧化二铁为改性纳米三氧化二铁。改性的三氧化二铁可以更进一步的促进干细胞向骨细胞分化。