[发明专利]寡肽的合成及在抑制柑橘致腐菌指状青霉的药物中的应用

说明书

本发明公开了一种寡肽Synpep的合成及在抑制柑橘致腐菌指状青霉的药物中的应用，该寡肽为5个氨基酸经线性连接而成，通过固相合成的方法制备而成，经高效液相和质谱检测确认。活性实验结果证实新型合成肽对柑橘采后致腐菌指状青霉（Penicillium digitatum）具有良好的抑制作用，在1 mg/ml的同浓度效果下与市售保鲜剂百可得相当，和结构差别极小的寡肽相比活性更好，没有溶血现象发生，说明该物质对人体没有明显毒副作用，说明经过这项技术制备而成的合成肽Synpep优势明显，是一种潜在的柑橘保鲜剂，可在工农业生产中进行大规模利用。

技术领域

本发明涉及一种新型寡肽的化学合成过程以及它对柑橘主要采后致腐菌指状青霉的抑制活性，具有应用于柑橘保鲜和生物防治的潜力。

背景技术

寡肽是指几个氨基酸脱水缩合连接而成的化合物, 近年来活性寡肽因其结构多样、广谱高效、分子量小、稳定性好、溶解度高且不易引起耐药性，被广泛应用于医药、食品、农业和饲料添加剂等领域。按照生成方式分为天然寡肽和人工合成寡肽两种，由于天然寡肽含量很低且结构未经修饰，故化学合成寡肽在基础和应用研究中占据着十分重要的地位。寡肽的人工合成选择性强，高效且稳定，主要可以用作：①确证天然寡肽或蛋白质的结构；②生产天然的、在生物体内含量极微但有医疗或其他生物效用的寡肽；③改变部分结构，研究其结构与功能的关系，并设计更有效的药物。

柑橘是我国南方农村地区的支柱产业之一，具有重大的经济价值和社会效益。但其储藏期短，在采收后表面分布的霉菌会引起柑橘发生腐败和变质，导致潜在的食品安全危机和巨大的经济损失。传统的化学杀菌剂虽然可以抑制上述霉菌的生长并提高柑橘的储藏期，但由于潜在的安全隐患正逐渐被淘汰，因此筛选到安全高效的生物杀菌剂引起了人们的广泛关注。前期实验中，我们在草酸青霉（Penicillium oxalicum）的培养液中找到一种对柑橘致腐菌具有抑制效果的天然寡肽，但由于其含量微小且提取纯品耗时长，所以利用化学方法设计合成出一条结构类似的人工寡肽，并且对柑橘主要的致腐菌指状青霉具有良好的抑制活性，为深入分析类似结构寡肽的结构和功能，对于开发新型的肽类抗生素和柑橘的生物保鲜等具有重要意义

发明内容

本发明的目的之一是提供一种新型合成肽的制备过程，为了解决天然活性肽提纯繁琐含量微小的问题，采取固相合成的方法制备了一种活性寡肽Synpep。

合成肽，平面结构为5个氨基酸连接的线性寡肽，具体氨基酸组成：Abu-N-Me-Thr-Thr-N-Me-Val-Ser，分子式：C₂₂H₄₁N₅O₉；分子量：519.61；具体结构式如下：

上述结构中的Abu为2-氨基丁酸，总共含有3个富含羟基的氨基酸。根据氨基酸的结构和抗菌寡肽的预测，利用固相合成方法制备得到的这条多羟基合成肽，极性强，水溶性好，极易溶解于多种溶剂；然后这条寡肽的结构设计完整，制备纯度高，其中作为活性前体的2-氨基丁酸也使这条合成肽对于抑制柑橘致腐菌的靶向性更强。

本发明的技术方案还包括含所述的合成肽的组合物，所述组合物的活性成分为所述的合成肽。所述的组合物中还包括辅药部分，所述的辅药为与所述的合成肽稳定存在的药学上可接受的赋形剂。

本发明的又一技术方案为合成肽的制备方法，包括如下步骤：

（1）树脂溶涨：将2-氯三酰氯树脂放入反应管中，加入DCM后振荡；

（2）接第一个氨基酸，除掉步骤（1）的溶剂后，加入Fmoc-Ser-OH氨基酸，加入DMF溶剂溶解，再加入DIEA，振荡后密封；其中Fmoc-Ser-OH氨基酸的加入量相对于2-氯三酰氯树脂至少3倍摩尔过量，DIEA加入量相对于2-氯三酰氯树脂至少10倍摩尔过量。