[发明专利]一种具有抑制肿瘤细胞增殖功能的Ku70蛋白突变体、基因及应用

说明书

本发明公开了一种具有抑制肿瘤细胞增殖功能的Ku70蛋白突变体、基因及应用。所述Ku70蛋白突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明利用Ku70蛋白对肿瘤细胞增殖的影响，通过人工改造，构造了可以有效抑制肿瘤增殖的变异型Ku70蛋白Mu4。体外抗肿瘤活性检测和动物实验都表明，改造后的蛋白表现出良好的抗肿瘤增殖特性，可用于研究Ku70参与肿瘤细胞增殖的作用机理，为开发抗肿瘤药物提供理论基础和模型。在医药领域具有一定的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，特别是涉及一种具有抑制肿瘤细胞增殖功能的Ku70蛋白突变体、基因及应用。

背景技术

干扰素、白介素是在临床肿瘤治疗中的常用的蛋白药物，但这些药物疗效一般只对部分病人敏感，毒副作用严重还会产生剂量依赖性。随着技术的发展，越来越多的外源性蛋白用于临床肿瘤治疗。

Ku蛋白是一类分布广泛的核蛋白，是由Ku70和Ku80两个亚基组成的异源二聚体。近年国内外研究表明Ku70与细胞周期调控，细胞分化程度，细胞核形态以及双链断裂DNA修复相关。研究发现，Ku70之所以可以催化断裂DNA修复是因为它与双链DNA断端的链接是非序列依赖性的方式，DNA依赖的蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)和与之结合的蛋白激酶全酶可以通过Ku70招募，这是Ku70较为主要的功能。除此之外，Ku70通过和促凋亡因子Bax结合可以抑制细胞的凋亡；细胞周期检查点相关蛋白Rad3/Rad26途径中Ku70发挥作用可以维持端粒的稳定性。而DNA损伤，修复缺陷和细胞周期调控的异常所导致的基因不稳定常常发生在肿瘤组织中。多项研究表明作为重要的DNA修复蛋白Ku70与多种癌症相关，在宫颈癌，乳腺癌，肺癌等肿瘤组织中，Ku70的表达显著高于正常组织。

近年来，Ku70蛋白与肿瘤发生发展的关系被高度关注，是肿瘤治疗研究中的热点。

比如，公开号为CN1873410的发明公开了一种在食管癌病人血清中检测肿瘤相关标志物的方法，以血清为分子探针，免疫沉淀肿瘤细胞中潜在的肿瘤抗原，富集的肿瘤抗原-抗体复合物经SDS-PAGE电泳分离、考马斯亮蓝染色、特异蛋白条带的酶解消化，肽段抽提，反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离和电喷雾离子化偶联在线离子阱质谱(ESI-IT-MS)鉴定等综合技术路线，筛选食管癌血清标志蛋白。筛选到的Ku70蛋白经免疫印迹实验证实为新的食管癌候选标志物，Ku70蛋白表达明显增高与早期食管癌癌变相关。

公开号为CN104211770A的发明公开了一类与热休克蛋白结合的神经胶质瘤抗原，包括Survivin-2B抗原肽、Ku70抗原肽和Ku80抗原肽。说明Ku70与神经胶质瘤相关。

如果研究人员通过分子生物学方法对Ku70蛋白进行人工改造，开发出一种可抑制肿瘤细胞增殖的外源蛋白，将具有极其重要的药用价值。

发明内容

本发明提供了一种可抑制肿瘤细胞增殖的人工改造外源蛋白，通过体外扩增得到含有该外源蛋白基因的表达载体，通过脂质体转染的方法使得肿瘤细胞表达该蛋白，从而通过细胞增殖活率检测方法来证明该外源蛋白可抑制肿瘤细胞的增殖。

一种具有抑制肿瘤细胞增殖功能的Ku70蛋白突变体，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明又提供了所述Ku70蛋白突变体在制备抗肿瘤药物中的应用。优选的，其中肿瘤为肺癌或宫颈癌。

本发明又提供了编码所述Ku70蛋白突变体的基因。优选的，所述的基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明还提供了所述基因在制备抗肿瘤药物中的应用。优选的，其中肿瘤为肺癌或宫颈癌。优选的，该应用在实施时，将所述基因导入癌细胞内表达出所述Ku70蛋白突变体。