[发明专利]适于冠状病毒提取、纯化和保存的复合缓冲液和试剂盒

说明书

本发明公开了复合缓冲液和试剂盒，其中，该复合缓冲液包括：2.05‑2.4M变性剂、2‑10体积％增溶剂、1‑7mM有机还原剂、40‑100mM两性离子缓冲液、1‑6mM非离子螯合剂、0.01‑0.05质量/体积％非离子型表面活性剂，且pH＝7.0‑8.0。该复合缓冲液理化性质稳定，便于室温保存运输，显著提高样本保存的稳定性，并能直接用于核酸样本的提取和纯化浓缩。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及适于冠状病毒提取、纯化和保存的复合缓冲液 和试剂盒。

背景技术

目前，核酸检测已广泛应用于临床和生物研究领域，而核酸样本的提取和保存效果直接 影响核酸检测的结果，而RNA对提取和保存溶液的要求更高。2020年1月12日，世界卫 生组织(WHO)发布公告，本次肺炎疫情由一种新型的冠状病毒(2019-nCov)导致。冠状病毒是一类在动物之间传播的病毒，核酸类型为单链RNA。卫健委发布的新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术指南(第三版)指导指出采集的材料包括呼吸材料(鼻咽和口拭子、 痰液、肺泡灌洗液等)和血清样本等，其中咽拭子、鼻拭子采样形式比较方便，在临床应用 中经常作为早期筛查以及轻症筛查的样本采集手段。拭子采样完成后，拭子头浸入的，含 3mL病毒保存液(也可使用等渗盐溶液、组织培养液或磷酸盐缓冲液)的管中，尾部弃去，旋紧盖管。核酸样本RNA降解是PCR检测中常见问题。目前常见的样品处理液一般为生理 盐水Hank’s缓冲液，在后续的核酸样本保存过程中，病原体会破裂，释放出核酸，但Hank’s 液无法抑制RNase活性，核酸很容易被降解，从而影响检测结果的灵敏度。实际临床核酸 检测中，标本还需要寄送到第三方检验中心进行检测，运输过程中需要维持低温保存冷链运输，代价比较高。因此标本的常温运输保存是急需要解决的问题。

另外样品采集后，医护人员在检验操作过程中容易带来实验室暴露感染。目前采取的高 温灭活的方式，虽然能实现病毒的无害化，但也会造成RNA模板的加速降解。所以如何实 现这些有生物危害性的样本采集后就被灭活，以减少实验室检验人员感染的风险，同时保证 检测灵敏度，也是需要解决的问题。

再者，临床的采样液体积太大，会造成病原模板的进一步稀释，样本制备的时候会加入 额外体积量的缓冲液进行模板回收，一次提取体系体积太大，也造成模板浓缩操作的各种不 便。最终导致体系中的模板浓度降低，进一步挑战下游qPCR的检测灵敏度。

由此，现有的核酸提取和保存的溶液有待改进。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提 出一种复合缓冲液，理化性质稳定，便于室温保存运输，显著提高样本保存的稳定性，并能 直接用于核酸样本的提取和纯化浓缩。

根据本发明的一个方面，本发明提供了一种复合缓冲液。根据本发明的实施例，该复合 缓冲液包括：2.05-2.4M变性剂、2-10体积％增溶剂、1-7mM有机还原剂、40-100mM两性离子缓冲液、1-6mM非离子螯合剂、0.01-0.05质量/体积％非离子型表面活性剂，且 pH＝7.0-8.0。

根据本发明实施例的复合缓冲液，理化性质稳定，便于室温保存运输，并且具有病原体 的灭活作用，可显著降低缓冲液实验室暴露感染的风险，显著提高样本保存的稳定性，同时， 具有抑制RNase活性功能，使RNA不被核酸酶降解，此外，该复合缓冲液还无害化病毒表 面的蛋白使之不能与细胞受体结合，并能直接用于核酸样本的提取和纯化浓缩，适于临床和 科研的广泛使用。

另外，根据本发明上述实施例的复合缓冲液还可以具有如下附加的技术特征：

根据本发明的实施例，所述变性剂为选自异硫氰酸胍和盐酸胍中的至少一种。

根据本发明的实施例，所述增溶剂为选自异丙醇和乙醇中的至少一种。