[发明专利]一种同时检测9种猪病原体的微流体芯片

说明书

本发明提供了一种同时检测9种猪病原体的微流体芯片，属于基因工程技术领域，将猪瘟病毒引物探针、猪伪狂犬病毒引物探针、猪嵴病毒引物探针、猪细小病毒I型引物探针、猪细小病毒Ⅳ型引物探针、猪流行性乙型脑炎病毒引物探针、美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒引物探针、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒引物探针、猪圆环病毒2型引物探针包被在微流体芯片上。芯片的敏感性：猪瘟病毒10拷贝、猪伪狂犬病毒100拷贝、猪嵴病毒100拷贝、猪细小病毒I型100拷贝，猪细小病毒IV型100拷贝，猪乙型脑炎病毒100拷贝，猪圆环病毒2型100拷贝，高致病性猪猪繁殖与呼吸综合征病毒100拷贝，美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒10拷贝。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种同时检测9种猪病原体的微流体芯片。

背景技术

猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒、猪繁殖和呼吸综合征病毒、高致病性猪繁殖和呼吸综合征病毒、猪流行性乙型脑炎病毒等9种病原体严重危害着重养猪业，快速、准确对该类猪病原体进行鉴别诊断，有助于动物疫病的预防和控制，对畜牧业的健康发展具有积极的意义。

目前用于猪瘟病毒、猪细小病毒、猪狂伪犬病毒、猪圆环病毒、猪繁殖和呼吸综合病毒、高致病性猪繁殖和呼吸综合病毒、猪流行性乙型脑炎病毒的实验室方法主要为PCR和荧光定量PCR方法，尽管二者的检测速度、灵敏度和特异性较传统的病毒培养及抗原检测的方法有了明显提高，但鉴于病毒种类繁多，当前临床应用中的PCR和荧光定量PCR检测方法单次只能检测单一或三种以内的猪病毒，无法同时对上述多种猪病毒进行筛查，若要筛查上述猪病原体必须通过多次荧光定量PCR或PCR方法检测后才能明确，费时费力，并且浪费样本。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种同时检测9种猪病原体的微流体芯片，采用本发明提供的微流体芯片能够同时检测9种猪病原体。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种同时检测9种猪病原体的微流体芯片，将猪瘟病毒引物探针、猪伪狂犬病毒引物探针、猪嵴病毒引物探针、猪细小病毒I型引物探针、猪细小病毒Ⅳ型引物探针、猪流行性乙型脑炎病毒引物探针、美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒引物探针、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒引物探针、猪圆环病毒2型引物探针包被在微流体芯片上；

所述猪瘟病毒引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQ IDNo.1～3所示；

所述猪伪狂犬病毒引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQ ID No.4～6所示；

所述猪嵴病毒引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQ IDNo.7～9所示；

所述猪细小病毒I型引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQ ID No.10～12所示；

所述猪细小病毒Ⅳ型引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQ ID No.13～15所示；

所述猪流行性乙型脑炎病毒引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQ ID No.16～18所示；

所述美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒引物探针的上游引物、下游引物、探针的核苷酸序列依次如SEQ ID No.19～21所示；

所述高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒引物探针的上游引物、下游引物、探针的的核苷酸序列依次如SEQ ID No.22～24所示；

所述猪圆环病毒2型引物探针的上游引物、下游引物和探针的核苷酸序列依次如SEQ ID No.25～27所示。

优选的，所述猪瘟病毒引物探针的探针的5'端添加FAM，3'端添加QSY1。