[发明专利]仿细胞结构纳米材料及其制备方法和应用

权利要求书

1.仿细胞结构纳米材料的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)培养目标细胞，细胞状态基本要求：细胞活力高于60％，细胞纯度大于80％，细胞数目在1-25×10⁷个/次，备用；

(2)取步骤(1)目标细胞在室温下2000rmp条件下离心弃上清，沉淀采用细胞膜提取裂解液重悬、并在冰上匀浆处理，2000rmp离心、收集上清液，沉淀采用细胞膜提取裂解液重悬；

(3)重复步骤(2)中的离心和重悬步骤，直至没有完整细胞；

(4)混合步骤(2)和步骤(3)收集的上清液，采用蔗糖-壳聚糖密度梯度离心得到纯化的细胞膜；

(5)取步骤(4)离心后每层样本，分析样本中的蛋白成分，用生理盐水稀释膜富集区域，4℃、20000g离心0.5小时，低压冻干、称重、加PBS、4℃储存；

(6)对步骤(5)储存的细胞膜进行蛋白定量分析，其中膜脂质质量浓度与膜蛋白质量浓度之比为1:4-3:1时，取与膜脂质浓度相等的经过表面等离子共振技术进行亲水化修饰的介孔纳米材料或负载目标物质的多功能介孔纳米材料加入细胞膜溶液中，在超声和0-4℃条件下反应1-12小时，9000rpm离心去除未结合的细胞膜，制得仿细胞结构纳米材料。

2.根据权利要求1所述的仿细胞结构纳米材料的制备方法，其特征在于，步骤(1)中目标细胞为肿瘤细胞、血球细胞、细菌或真菌。

3.根据权利要求1所述的仿细胞结构纳米材料的制备方法，其特征在于，步骤(2)中细胞数目在1-25×10⁷个/次，且两次离心的时长均为5min。

4.根据权利要求1所述的仿细胞结构纳米材料的制备方法，其特征在于，步骤(2)中的细胞膜提取裂解液的配方为：20mM蔗糖，1mM壳聚糖，1mM NaOH、1mM Tris/HCl，0.1mM PMSF，胰蛋白酶抑制剂100μg/mL，RNase 5μg/mL，DNase 5μg/mL终浓度，pH 7.4。

5.根据权利要求1所述的仿细胞结构纳米材料的制备方法，其特征在于，步骤(4)中采用蔗糖-壳聚糖密度梯度离心的具体方法为：将混合后的上清液倒入不连续蔗糖-壳聚糖密度梯度液中，蔗糖-壳聚糖密度梯度液浓度w/v分别为60％、45％和25％；然后4℃、20000g离心30min，收集蔗糖-壳聚糖密度梯度液45％/25％交界处的样本。

6.根据权利要求1所述的仿细胞结构纳米材料的制备方法，其特征在于，步骤(6)中的介孔纳米材料为：介孔二氧化硅、介孔硅、介孔碳、金属氧化物、金属硫化物、有机聚合物、有机-无极杂化、金属中的至少一种；介孔纳米材料负载的目标物质为：抗肿瘤药物、抗病毒药物、抗细菌药物、生物活性物质中的至少一种。

7.由权利要求1-6任一所述方法制备获得的仿细胞结构纳米材料。

8.权利要求7所述仿细胞结构纳米材料在制备抗肿瘤、抗病毒或抗细菌药物的递送载体中的应用。