[发明专利]一种基于RAA-CRISPR-cas13a检测HBV cccDNA的试剂盒

权利要求书

1.一种核酸分子组合物，由引物F1、引物R1和特异crRNA组成；

引物F1为序列表的序列1所示的单链DNA分子；

引物R1为序列表的序列2所示的单链DNA分子；

特异crRNA为序列表的序列3所示的单链RNA分子。

2.一种用于检测HBV cccDNA的试剂盒，包括权利要求1所述的核酸分子组合物。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括不降解质粒的ATP依赖的DNA酶。

4.如权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括LwCas13a蛋白。

5.如权利要求2或3或4所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括用于RAA扩增的试剂或试剂盒。

6.如权利要求2或3或4或5所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括记载有检测方法的载体；所述检测方法包括如下步骤：

(1)提取受试者肝脏组织的总DNA，然后进行PSAD消化；

(2)取步骤(1)的产物溶液，作为模板溶液，采用引物F1和引物R1组成的引物对进行RAA扩增；

(3)取步骤(2)的产物溶液，进行基于CRISPR-Cas13a系统的可视化检测；所述CRISPR-Cas13a系统的crRNA为所述特异crRNA。

7.权利要求1所述核酸分子组合物在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的用途为检测HBV cccDNA。

8.组件1、组件2、组件3和组件4在在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的用途为检测HBV cccDNA；

所述组件1为权利要求1所述核酸分子组合物；

所述组件2为不降解质粒的ATP依赖的DNA酶；

所述组件3为LwCas13a蛋白；

所述组件4为用于RAA扩增的试剂或试剂盒。

9.权利要求1所述核酸分子组合物在检测HBV cccDNA中的应用。

10.一种检测HBV cccDNA的方法，包括如下步骤：

(1)提取受试者肝脏组织的总DNA，然后进行PSAD消化；

(2)取步骤(1)的产物溶液，作为模板溶液，采用引物F1和引物R1组成的引物对进行RAA扩增；引物F1为序列表的序列1所示的单链DNA分子，引物R1为序列表的序列2所示的单链DNA分子；

(3)取步骤(2)的产物溶液，进行基于CRISPR-Cas13a系统的可视化检测；所述CRISPR-Cas13a系统中的crRNA如序列表的序列3所示。